發(fā)布時(shí)間：2024-05-13 18:48

　　二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶(DGAT)是催化三酰甘油生物合成的關(guān)鍵酶,在三酰甘油的合成和積累過(guò)程中具有重要調(diào)控作用。為了研究大豆DGAT基因表達(dá)調(diào)控的分子機(jī)制,以大豆品種科豐1號(hào)為材料,通過(guò)PCR方法對(duì)GmDGAT1A的啟動(dòng)子(promoter-GmDGAT1A,pGmDGATIA)進(jìn)行克隆,并通過(guò)轉(zhuǎn)化擬南芥和GUS組織定位研究其功能。結(jié)果表明:以大豆葉片DNA為模板,成功克隆到GmDGAT1A基因ATG上游2 192 bp啟動(dòng)子序列。序列分析表明,pGmDGAT1A除具有啟動(dòng)子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本順式作用元件外,還含有多個(gè)響應(yīng)于光、赤霉素和脫落酸等順式作用元件。以GUS為報(bào)告基因,成功構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A,并轉(zhuǎn)化野生型擬南芥獲得轉(zhuǎn)基因植株。對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥植株進(jìn)行PCR檢測(cè),能擴(kuò)增到2 192 bp目標(biāo)條帶,表明已獲得含有pGmDGAT1A的轉(zhuǎn)基因擬南芥陽(yáng)性植株。GUS組織化學(xué)染色結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗的葉脈和根染色較深,但是主根和側(cè)根的根尖部分未染色;成熟期轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的根、葉脈以及角果內(nèi)的隔膜和珠柄染色較深,莖和...

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【部分圖文】：

圖1大豆基因組DNA的提取(A)及GmDGAT1A啟動(dòng)子的擴(kuò)增(B)

用已克隆的GmDGAT1A基因ID號(hào)(Glyma.13G106100/Glyma13g16560)檢索大豆基因組數(shù)據(jù)庫(kù),得到其ATG上游約2000bp的啟動(dòng)子序列。然后,在該啟動(dòng)子序列上下游約500bp范圍內(nèi)設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,并以大豆品種科豐1號(hào)DNA(圖1-A)為模板,....

圖2表達(dá)載體pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A的酶切鑒定

將pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A表達(dá)載體通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化擬南芥,成熟后收獲T0轉(zhuǎn)基因種子。對(duì)T0轉(zhuǎn)基因種子用含有潮霉素的MS培養(yǎng)基進(jìn)行抗性篩選后,進(jìn)一步對(duì)T1擬南芥幼苗進(jìn)行基因組DNA提取和PCR檢測(cè)。結(jié)果表明,T1轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗和陽(yáng)性對(duì)照(表達(dá)載體質(zhì)粒)均能....

圖3T1轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗的PCR檢測(cè)

對(duì)轉(zhuǎn)pGmDGAT1A擬南芥植株各組織進(jìn)行GUS組織化學(xué)染色,結(jié)果表明,pGmDGAT1A驅(qū)動(dòng)的GUS主要在轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗的葉脈(圖4-A1-A2)和根(圖4-A1、A3-A4)中表達(dá),在主根和側(cè)根的根尖部分(圖4-A3-A4)不表達(dá);在成熟期轉(zhuǎn)基因擬南芥植株中,葉脈(圖4-B....

圖4轉(zhuǎn)pGmDGAT1A擬南芥植株不同組織的GUS染色

圖3T1轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗的PCR檢測(cè)3結(jié)論與討論

本文編號(hào)：3972553