二酰甘油�；D移酶(DGAT)是催化三酰甘油生物合成的關鍵酶,在三酰甘油的合成和積累過程中具有重要調控作用。為了研究大豆DGAT基因表達調控的分子機制,以大豆品種科豐1號為材料,通過PCR方法對GmDGAT1A的啟動子(promoter-GmDGAT1A,pGmDGATIA)進行克隆,并通過轉化擬南芥和GUS組織定位研究其功能。結果表明:以大豆葉片DNA為模板,成功克隆到GmDGAT1A基因ATG上游2 192 bp啟動子序列。序列分析表明,pGmDGAT1A除具有啟動子所必需的TATA-box和CAAT-box等基本順式作用元件外,還含有多個響應于光、赤霉素和脫落酸等順式作用元件。以GUS為報告基因,成功構建了植物表達載體pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A,并轉化野生型擬南芥獲得轉基因植株。對轉基因擬南芥植株進行PCR檢測,能擴增到2 192 bp目標條帶,表明已獲得含有pGmDGAT1A的轉基因擬南芥陽性植株。GUS組織化學染色結果顯示,轉基因擬南芥幼苗的葉脈和根染色較深,但是主根和側根的根尖部分未染色;成熟期轉基因擬南芥植株的根、葉脈以及角果內的隔膜和珠柄染色較深,莖和...

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【部分圖文】：

圖1大豆基因組DNA的提取(A)及GmDGAT1A啟動子的擴增(B)

用已克隆的GmDGAT1A基因ID號(Glyma.13G106100/Glyma13g16560)檢索大豆基因組數(shù)據(jù)庫,得到其ATG上游約2000bp的啟動子序列。然后,在該啟動子序列上下游約500bp范圍內設計1對特異性引物,并以大豆品種科豐1號DNA(圖1-A)為模板,....

圖2表達載體pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A的酶切鑒定

將pCAMBIA1381Z-pGmDGAT1A表達載體通過農桿菌介導法轉化擬南芥,成熟后收獲T0轉基因種子。對T0轉基因種子用含有潮霉素的MS培養(yǎng)基進行抗性篩選后,進一步對T1擬南芥幼苗進行基因組DNA提取和PCR檢測。結果表明,T1轉基因擬南芥幼苗和陽性對照(表達載體質粒)均能....

圖3T1轉基因擬南芥幼苗的PCR檢測

對轉pGmDGAT1A擬南芥植株各組織進行GUS組織化學染色,結果表明,pGmDGAT1A驅動的GUS主要在轉基因擬南芥幼苗的葉脈(圖4-A1-A2)和根(圖4-A1、A3-A4)中表達,在主根和側根的根尖部分(圖4-A3-A4)不表達;在成熟期轉基因擬南芥植株中,葉脈(圖4-B....

圖4轉pGmDGAT1A擬南芥植株不同組織的GUS染色

圖3T1轉基因擬南芥幼苗的PCR檢測3結論與討論

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