維氏氣單胞菌(Aerornonas veronii,AV)是多數(shù)水生動(dòng)物的病原菌之一,在某些條件下也可引起人類感染發(fā)病。由于該菌可引起多種魚類感染發(fā)病,嚴(yán)重危害著養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。由于抗生素耐藥性及感染魚類后可快速傳播等問(wèn)題,在水產(chǎn)養(yǎng)殖中接種疫苗仍是最有效的預(yù)防細(xì)菌感染魚類的方式之一。在與細(xì)菌毒力相關(guān)的多種毒力因子中,由于外膜蛋白(outer membrane protein)暴露于菌體表面且與細(xì)菌致病性密切相關(guān),被廣泛地應(yīng)用于疫苗開發(fā)研究中。本研究克隆了A.veronii TH0426株OmpAⅠ基因,通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建了OmpAⅠ基因的原核表達(dá)載體,以鯉魚源干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)作為外源基因表達(dá)載體,分別構(gòu)建了Lc-pPG-1-OmpAⅠ表面表達(dá)型與Lc-pPG-2-OmpAⅠ分泌表達(dá)型重組乳酸菌,通過(guò)Western blotting與間接免疫熒光驗(yàn)證Omp AⅠ基因在乳桿菌中的表達(dá)情況。結(jié)果顯示,經(jīng)PCR擴(kuò)增出約1000 bp OmpAⅠ基因,兩種重組乳桿菌表達(dá)的約45 kDa蛋白具有良好的反應(yīng)原性,熒光顯微鏡下可在Lc-pPG-1-OmpAⅠ菌...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1.1OmpAI基因的PCR擴(kuò)增M：DL2000DNAMarker；1：PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；2：陰性對(duì)照

根據(jù)樣品數(shù)量，以50：1比例將加到96孔板中；向孔板中加入200μLBCA工作液，37℃放置定性分析Lc-pPG-2-OmpAⅠ重組菌分別厭氧培養(yǎng)8h，再以相同比例轉(zhuǎn)提取質(zhì)粒送至長(zhǎng)春庫(kù)美生物公引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，經(jīng)電泳檢

圖1.2pMD-18T-OmpAⅠ質(zhì)粒提取結(jié)果

圖1.2pMD-18T-OmpAⅠ質(zhì)粒提取0DNAMarker；1-4：pMD-18T-OmeparationofrecombinantplasmidofpDL5000DNAMarker;1-4:recombin增與酶切鑒定，進(jìn)行目的基因的PCR擴(kuò)....

圖1.3pMD-18T-OmpAⅠ重組質(zhì)粒PCR擴(kuò)增與酶切鑒定結(jié)果

20pMD-18T-OmpAⅠ重組質(zhì)粒PCR擴(kuò)增與酶切鑒DNAMarker；1：重組質(zhì)粒酶切鑒定；2：重組dentificationofrecombinantplasmidpMD-18T-OPCRanddigestedwithrestrictionenzy....

圖1.4重組質(zhì)粒pET30a-OmpAI的鑒定M1：DL2000DNAMarker；M2：λ-HindIIIDNAMarker

圖1.4重組質(zhì)粒pET30a-OmpAI的鑒定DL2000DNAMarker；M2：λ-HindIIIDNA組質(zhì)粒PCR產(chǎn)物；2：pET30a-OmpAI雙酶4IdentificationofrecombinantplasmidpET30a:DL....

本文編號(hào)：3957593