蚜蟲隸屬于昆蟲綱(Insecta)半翅目(Hemiptera),繁殖速度快,廣泛分布于世界各地,主要通過刺吸植物韌皮部汁液為生。前人研究中發(fā)現(xiàn)麥長管蚜Sitobion avenae孤雌蚜有翅和無翅個體中存在很多差異表達(dá)的微小RNA(microRNA,miRNA)。為進(jìn)一步研究這些miRNA在蚜蟲翅型分化中的調(diào)控機(jī)制,本研究以豌豆蚜Acyrthosiphon pisum為研究對象,選擇在麥長管蚜中差異表達(dá)顯著,且靶基因?yàn)橥懫ぜに�、胰島素信號通路及翅型發(fā)育關(guān)鍵基因的5個miRNA(Let-7、miR-92a、miR-92b、miR-92a-1-p5和miR-277),使用miRanda和RNAhybrid軟件在豌豆蚜中預(yù)測其靶基因。同時,利用qPCR檢測這些miRNA及其靶標(biāo)基因在豌豆蚜3⁴齡幼蚜和成蟲有翅和無翅個體中的表達(dá)譜。然后在外源HEK293細(xì)胞系中,通過雙熒光素酶活性檢測法上述miRNA的靶基因進(jìn)行驗(yàn)證。最后用蛻皮激素(20E)處理豌豆蚜2齡幼蚜,檢測5個miRNA及其靶標(biāo)基因在處理后表達(dá)量的變化,探索蛻皮激素如何通過miRNA調(diào)控蚜蟲翅型分化。主要研究結(jié)果...

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【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)與綜述
    1.1 蚜蟲概述
        1.1.1 蚜蟲
        1.1.2 豌豆蚜
    1.2 蚜蟲的翅多型現(xiàn)象
    1.3 蚜蟲的翅型分化調(diào)控
    1.4 蛻皮激素對miRNA及翅型的調(diào)控
    1.5 miRNA
        1.5.1 miRNA簡介
        1.5.2 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        1.5.3 miRNA的作用機(jī)制
        1.5.4 miRNA靶基因的預(yù)測
        1.5.5 miRNA靶基因驗(yàn)證
    1.6 RNAi概述
    1.7 研究的目的與意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
    2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)試劑及溶液配制
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 豌豆蚜的飼養(yǎng)和蛻皮激素處理
        2.4.2 總RNA的提取
        2.4.3 數(shù)據(jù)分析與引物設(shè)計(jì)
        2.4.4 miRNA靶基因預(yù)測及驗(yàn)證
        2.4.5 實(shí)時熒光定量PCR檢測
        2.4.6 基因克隆
        2.4.7 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        2.4.8 豌豆蚜RNAi
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 豌豆蚜miRNA靶基因的預(yù)測
    3.2 miRNA在豌豆蚜不同齡期及有翅和無翅個體中的表達(dá)譜
    3.3 miRNA靶基因在豌豆蚜不同齡期有翅和無翅個體中的表達(dá)譜
    3.4 miRNA與靶標(biāo)體外互作驗(yàn)證
        3.4.1 Let-7 與靶基因abrupt的互作驗(yàn)證
        3.4.2 miR-92a-1-p5 與靶基因flightin體外互作驗(yàn)證
    3.5 蛻皮激素處理對miRNA及靶標(biāo)表達(dá)的影響
    3.6 蛻皮激素處理對靶基因表達(dá)的影響
第四章 討論與展望
    4.1 討論
        4.1.1 miRNA和靶基因在不同齡期及有翅和無翅個體中的表達(dá)譜結(jié)果分析
        4.1.2 miRNA靶基因的驗(yàn)證分析
        4.1.3 蛻皮激素處理對miRNA和靶基因表達(dá)的影響分析
        4.1.4 豌豆蚜RNAi結(jié)果分析
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的研究成果
致謝



本文編號：3957671