目的:棉花枯萎病是影響我國(guó)棉花產(chǎn)量和品質(zhì)的最重要病害之一,挖掘抗病相關(guān)基因是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育棉花抗枯萎病品種的基礎(chǔ)。植物轉(zhuǎn)錄因子在抗病信號(hào)途徑中起著重要作用,其中WRKY轉(zhuǎn)錄因子在植物抗病中必不可少的。本實(shí)驗(yàn)是從陸地棉抗病材料中克隆棉花抗枯萎病相關(guān)WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因Gh WRKY48,分析該基因的表達(dá)特性,并初步研究其功能,為棉花抗枯萎病分子育種提供基因資源。方法:本實(shí)驗(yàn)以枯萎病菌誘導(dǎo)棉花根部基因表達(dá)譜中篩選得到WRKY基因片段為探針,通過(guò)電子克隆技術(shù)從高抗枯萎病的陸地棉中克隆WRKY轉(zhuǎn)錄因子基因Gh WRKY48。通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析Gh WRKY48基因在枯萎病菌、水楊酸(SA)、茉莉酸(JA)、乙烯(ET)脅迫下的表達(dá)方式;利用VIGS沉默技術(shù)初步研究該基因功能。結(jié)果:1、從抗病棉花品種“中棉所12”號(hào)根部c DNA中克隆得到一個(gè)抗枯萎病相關(guān)的WRKY轉(zhuǎn)錄因子。通過(guò)多序列比對(duì)分析該基因?qū)儆诘冖蝾?lèi)WRKY轉(zhuǎn)錄因子家族,將其命名為Gh WRKY48。序列分析發(fā)現(xiàn),該基因c DNA全長(zhǎng)為1074個(gè)核苷酸,編碼了357個(gè)氨基酸,含有1個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域及1個(gè)C2H2型鋅指結(jié)構(gòu)。2...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖1VIGS技術(shù)的機(jī)制圖（引用）

棉花抗枯萎病相關(guān)基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析8圖1VIGS技術(shù)的機(jī)制圖（引用）Figure1MechanismofVIGStechnology(Reference)1.5.2VIGS載體病毒VIGS載體有DNA病毒改造、RNA病毒改造和衛(wèi)星病毒改造這三種類(lèi)型。它們分別....

圖2生物信息學(xué)分析件Figure.2Bioinformaticsanalysissoftware

棉花抗枯萎病相關(guān)基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析在Cottongen數(shù)據(jù)庫(kù)和NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的基礎(chǔ)上，利用生物信息學(xué)的一系列軟件分析GhWRKY48基因的開(kāi)放閱讀區(qū)、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和磷酸化位點(diǎn)等，用MEGA5.05軟件進(jìn)行進(jìn)化樹(shù)分析，用....

圖3.GhWRKY48基因的PCR產(chǎn)物、pMD19-T-GhWRKY48酶切產(chǎn)物和GhWRKY48基

棉花抗枯萎病相關(guān)基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析24凝膠電泳中檢測(cè)，擴(kuò)增一條清晰的條帶，與預(yù)期的結(jié)果1074bp條帶大小相似（圖3A），膠回收目的片段后與克隆載體pMD19-T連接，獲得pMD19-T-GhWRKY48重組質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)過(guò)PCR和KpnI與BamH....

圖4.A:同源基因不同植物的氨基酸序列比對(duì)（“-”：WRKY保守域“▲”：鋅指結(jié)構(gòu)）;B:GhWRKY48與同源基因的氨基酸序列的進(jìn)化樹(shù)

棉花抗枯萎病相關(guān)基因GhWRKY48的克隆及功能初步分析26B圖4.A:同源基因不同植物的氨基酸序列比對(duì)（“-”：WRKY保守域“▲”：鋅指結(jié)構(gòu)）;B:GhWRKY48與同源基因的氨基酸序列的進(jìn)化樹(shù)Figure4.A:Comparisonofaminoacidsequenceso....

本文編號(hào)：3952093