為了探究小麥WRKY基因的功能,該研究采用RT-PCR方法,在小麥葉片組織中克隆WRKY基因,并對其進(jìn)行生物信息學(xué)和不同逆境脅迫下的表達(dá)分析。結(jié)果表明:(1)成功克隆得到1個小麥WRKY基因,命名為TaWRKY47。(2)TaWRKY47基因開放閱讀框長度為900 bp,編碼299個氨基酸,含有一個WRKY保守結(jié)構(gòu)域和一個C₂HC鋅指結(jié)構(gòu)域,屬于WRKY基因家族的第Ⅲ類成員。(3)亞細(xì)胞定位分析結(jié)果顯示,TaWRKY47蛋白定位于細(xì)胞核。(4)熒光定量PCR結(jié)果表明,TaWRKY47基因在小麥根、莖、葉、雄蕊和雌蕊中均有表達(dá),其中在雌蕊中表達(dá)量最高,且受低溫、干旱、鹽、ABA和H₂O₂等脅迫表達(dá)增強(qiáng),推測TaWRKY47基因參與了小麥的逆境脅迫過程。該研究結(jié)果為進(jìn)一步研究TaWRKY47基因功能與抗逆機(jī)制奠定了理論基礎(chǔ)。

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圖1TaWRKY47基因RT-PCR擴(kuò)增

利用PlantCare對TaWRKY47起始密碼子上游1500bp的啟動子區(qū)域進(jìn)行分析(表2),結(jié)果表明,除含有真核生物啟動子固有的TATA和CAAT元件外,還包含ABREABA響應(yīng)元件、低溫響應(yīng)元件LTR和茉莉酸響應(yīng)元件CGTCA-motif等多種響應(yīng)逆境脅迫的順式....

圖2TaWRKY47基因核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列

圖1TaWRKY47基因RT-PCR擴(kuò)增圖3TaWRKY47與其他物種WRKY蛋白質(zhì)序列多重比較

圖3TaWRKY47與其他物種WRKY蛋白質(zhì)序列多重比較

圖2TaWRKY47基因核苷酸序列及其推導(dǎo)的氨基酸序列2.5小麥TaWRKY47基因的組織特異性表達(dá)

圖4TaWRKY47蛋白與其他植物WRKY蛋白的

為了解TaWRKY47基因在小麥不同組織部位中的表達(dá)情況,采用qRT-PCR技術(shù)檢測了該基因在根、莖、葉、雄蕊和雌蕊5個部位的表達(dá)量。結(jié)果(圖6)顯示,TaWRKY47基因在根、莖、葉、雄蕊和雌蕊等5個部位中均有表達(dá),在雌蕊中表達(dá)量最高,其次是莖,在雄蕊中表達(dá)量最低。2.6Ta....

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