發(fā)布時(shí)間：2024-04-11 18:16

　　卵殼蛋白基因(Chorion protein,CP)是構(gòu)建卵殼的重要基因,卵殼蛋白基因家族編碼組成的卵殼蛋白占果蠅卵殼干重的95%以上。卵殼功能極為重要,它包裹在卵的表面保護(hù)卵免受外界環(huán)境的脅迫、進(jìn)行必要的生存物質(zhì)交換(如水分、氣體、營(yíng)養(yǎng)等)以及精子與卵結(jié)合通道等重要的生理功能。卵殼的行成發(fā)生在卵發(fā)育的14個(gè)階段的末端,由CP基因控制表達(dá)的mRNA的形成或者消失來(lái)控制相應(yīng)卵殼蛋白的表達(dá)。整個(gè)過(guò)程十分復(fù)雜,具有嚴(yán)格的時(shí)間、空間特異性。本文在首先FlyBase內(nèi)篩選出卵殼蛋白相關(guān)基因,構(gòu)建CP基因UAS-RNAi/Gal4雜交體系進(jìn)行基因干擾(RNA interference,RNAi),通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析各雜交株系的產(chǎn)卵能力以及卵孵化能力篩選出影響較為顯著的雜交株系,并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-qPCR)確認(rèn)其基因表達(dá)是否成功。然后拍攝觀(guān)察CP基因RNAi卵表面微結(jié)構(gòu)及形態(tài)、卵巢形態(tài)及卵巢小管發(fā)育狀況,并電泳分離卵巢總蛋白、卵總蛋白,對(duì)比CP基因RNAi株系與親本之間的蛋白表達(dá)差異。最后對(duì)所篩選出孵化率低于50%高于20%的CP基因RNAi株系的化蛹、羽化、壽命等發(fā)育過(guò)程進(jìn)行探究。具體結(jié)果...

【文章頁(yè)數(shù)】：110 頁(yè)

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
1 緒論
    1.1 果蠅簡(jiǎn)介、果蠅卵發(fā)育過(guò)程及卵殼的形成
        1.1.1 果蠅簡(jiǎn)介
        1.1.2 果蠅卵發(fā)育過(guò)程
        1.1.3 果蠅卵殼的形成
    1.2 昆蟲(chóng)卵殼基因、蛋白、結(jié)構(gòu)及構(gòu)建過(guò)程概述
        1.2.1 昆蟲(chóng)卵殼基因分布位置
        1.2.2 昆蟲(chóng)卵殼蛋白及微量元素組成
        1.2.3 昆蟲(chóng)卵殼的形態(tài)及功能
        1.2.4 昆蟲(chóng)卵殼構(gòu)建過(guò)程
        1.2.5 昆蟲(chóng)卵畸形突變的研究
        1.2.6 昆蟲(chóng)卵孵化過(guò)程
    1.3 課題研究?jī)?nèi)容及意義
    1.4 課題來(lái)源與內(nèi)容安排
2 CP基因RNAi后代的獲取
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
        2.1.1 供試果蠅
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品
        2.1.3 培養(yǎng)基的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 UAS-RNAi/Gal4 雜交后代的獲取
        2.2.2 果蠅產(chǎn)卵能力實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 果蠅卵孵化能力實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 UAS-RNAi與 Gal4 雜交株系基因表達(dá)檢測(cè)(Trizol法)
    2.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        2.4.1 CP基因RNAi后代產(chǎn)卵能力分析
        2.4.2 CP基因RNAi后代孵化能力
        2.4.3 Gal4 品系與UAS-RNAi品系雜交后代基因表達(dá)檢測(cè)
    2.5 討論
3 CP基因?qū)β延绊?br>    3.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
        3.1.1 供試果蠅
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及藥品
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 果蠅卵形態(tài)拍攝
        3.2.2 果蠅卵表面微觀(guān)結(jié)構(gòu)拍攝
    3.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        3.4.1 CP基因?qū)β研螒B(tài)的影響′
        3.4.2 CP基因?qū)β驯砻嫖⒔Y(jié)構(gòu)的影響
    3.5 討論
4 CP基因?qū)壜殉驳挠绊?br>    4.1 實(shí)驗(yàn)試劑、材料與設(shè)備
        4.1.1 供試果蠅
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 果蠅卵巢形態(tài)拍攝
        4.2.2 果蠅卵巢DAPI染色拍攝
        4.2.3 果蠅卵巢小管統(tǒng)計(jì)
    4.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        4.4.1 CP基因?qū)壜殉沧匀恍螒B(tài)的影響
        4.4.2 CP基因?qū)壜殉舶l(fā)育的影響
        4.4.3 CP基因?qū)壜殉埠怂釗p傷及卵巢小管的影響
    4.5 討論
5 CP基因?qū)β鸭奥殉驳鞍妆磉_(dá)的影響
    5.1 實(shí)驗(yàn)試劑、材料與設(shè)備
        5.1.1 供試果蠅
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器與藥品
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 果蠅卵總蛋白蛋白電泳分離
        5.2.2 果蠅卵巢總蛋白電泳分離
        5.2.3 果蠅卵巢總蛋白測(cè)序分析
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.3.1 CP基因?qū)β训鞍妆磉_(dá)的影響
        5.3.2 CP基因?qū)壜殉部偟鞍椎挠绊?br>        5.3.3 卵蛋白測(cè)序
    5.4 討論
6 CP基因?qū)壔肌⒂鸹皦勖挠绊?br>    6.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器設(shè)備
        6.1.1 供試果蠅
    6.2 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.1 CP基因RNAi品系化蛹實(shí)驗(yàn)
        6.2.2 CP基因RNAi品系羽化實(shí)驗(yàn)
        6.2.3 CP基因RNAi品系壽命實(shí)驗(yàn)
    6.3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理
    6.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        6.4.1 CP基因?qū)壔悸始坝鸹实挠绊?br>        6.4.2 CP基因?qū)壔技坝鸹瘯r(shí)間的影響
        6.4.3 CP基因?qū)墘勖挠绊?br>    6.5 討論
7 結(jié)論、創(chuàng)新點(diǎn)與展望
    7.1 結(jié)論
    7.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    7.3 展望
作者簡(jiǎn)歷
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3950961