自然環(huán)境微生物資源豐富,但大部分處于不可培養(yǎng)或難培養(yǎng)狀態(tài),采用純培養(yǎng)方法獲得的微生物僅占環(huán)境中微生物總數(shù)的0.01%-10%。許多細(xì)菌在不良環(huán)境中進(jìn)入休眠狀態(tài),即活的非可培養(yǎng)狀態(tài)(Viable but nonculturable state,VBNC),在適宜條件下VBNC狀態(tài)細(xì)菌能復(fù)蘇為正常的可培養(yǎng)形式�；【亲匀画h(huán)境廣泛存在的革蘭氏陰性菌,其中哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)是危害我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物重要病原菌之一,該菌在不良環(huán)境下可進(jìn)入VBNC狀態(tài),細(xì)胞復(fù)蘇后仍保持致病性。從VBNC狀態(tài)恢復(fù)為可培養(yǎng)狀態(tài)的作用機(jī)理尚未明確。本論文主要進(jìn)行了哈維氏弧菌環(huán)境適應(yīng)性相關(guān)蛋白YeaZ及主要互作蛋白YjeE、YgjD的研究,進(jìn)行了yjeE、ygjD基因克隆、結(jié)構(gòu)域特征、基因表達(dá)及酶活性分析,并研究了YeaZ活性位點(diǎn)不同突變體的酶活性和生物學(xué)作用,以探究哈維氏弧菌環(huán)境適應(yīng)性及存活機(jī)制,主要研究?jī)?nèi)容如下:從哈維氏弧菌SF-1基因組擴(kuò)增得到y(tǒng)jeE基因,大小為465bp,編碼153個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。序列分析顯示,yjeE基因序列與大腸桿菌(Escherichia coli)、副溶血弧菌(V....

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2.1pUcm-T質(zhì)粒圖譜

圖2.2pCzn1質(zhì)粒圖譜

8圖2.2pCzn1質(zhì)粒圖譜Fig.2.2pCzn1vector主要設(shè)備和試劑

圖2.3哈維氏弧菌yjeE基因的PCR擴(kuò)增M.DL2000DNAMarker；1-2.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物Fig.2.3PCRproductofyjeEgeneobtainedbyamplificationfromVibrioharveyi1-2.PCRproductfromVibrio

上所述的緩沖液，酶促液待測(cè)酶液。生長(zhǎng)作用菌生長(zhǎng)促進(jìn)作用，在5mL0.5mg/mL的YjeE蛋白促生長(zhǎng)作用。以煮沸滅活于595nm波長(zhǎng)下測(cè)定其檢測(cè)膠電泳檢測(cè)獲得長(zhǎng)度約為大小的yjeE基因全序列21M

圖2.6哈維氏弧菌YjeE蛋白親/疏水分析

脂肪系數(shù)（AI）為83.57，親水性平均值（GRAVY）為-0.419。利用ProScaLe對(duì)哈維氏弧菌YjeE蛋白氨基酸序列的疏水性和親水性進(jìn)行預(yù)測(cè)（如圖2.6），從圖中可以知道，YjeE多肽鏈的Ile分值最高（4.500）具有最強(qiáng)的疏水性，Arg的分值最低（....

本文編號(hào)：3948704