虹鱒(Oncorhynchus mykiss)是一種在北方地區(qū)廣泛養(yǎng)殖的冷水性魚類,對(duì)高溫具有低耐受性和高敏感性,隨著虹鱒養(yǎng)殖業(yè)集約化、規(guī)�；陌l(fā)展,虹鱒在夏季面臨的生存考驗(yàn)愈加嚴(yán)峻,很易因熱應(yīng)激造成大面積死亡或減產(chǎn)。課題組前期通過(guò)高通量測(cè)序研究虹鱒熱應(yīng)激前后(18℃和24℃)差異表達(dá)的miRNA時(shí)發(fā)現(xiàn),在虹鱒頭腎中存在兩個(gè)未知mi RNA,其在熱應(yīng)激前后差異表達(dá)極顯著(^**P<0.01),分別暫命名為novel-434和novel-242(novel-434和novel-242均為測(cè)序所得novel miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)中miRNA的排序)。通過(guò)miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件mi Randa對(duì)其靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)分析,發(fā)現(xiàn)novel-434和novel-242分別負(fù)向調(diào)控重要的靶基因HSPA4L和CRT。鑒于此,本研究選擇HSPA4L作為novel-434待驗(yàn)證的靶基因,CRT作為novel-242待驗(yàn)證的靶基因,利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)驗(yàn)證其靶標(biāo)關(guān)系,并通過(guò)GO注釋和KEGG分析其功能和調(diào)控機(jī)制。具體試驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論如下:1.成功克隆pmirGLO-HSPA4L 3’...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結(jié)合位點(diǎn)

圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結(jié)合位點(diǎn)Figure2-1Thebindingsitesofnovel-434withHSPA4LmRNA3'-UTR劃線部分為生物信息學(xué)預(yù)測(cè)的miRNA與靶基因3’UTR結(jié)合位點(diǎn)....

圖2-2novel-242與CRTmRNA3'-UTR結(jié)合位點(diǎn)

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)2018屆碩士學(xué)位論文圖2-1novel-434與HSPA4LmRNA3'-UTR結(jié)合位點(diǎn)Figure2-1Thebindingsitesofnovel-434withHSPA4LmRNA3'-UTR線部分為生物信息學(xué)預(yù)測(cè)的miRN....

圖2-3載體克隆試驗(yàn)原理

22min。12000r/min離心2min，收集DNA溶液（注：洗脫液體積不應(yīng)小于30μ回收效率）。重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟（8）。）將洗脫后的DNA產(chǎn)物保存在-20℃冰箱，便于后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。性化pmirGLO載體與HSPA4L/CRT3'-UTR連接靶基....

圖2-4pmirGLO載體多克隆位點(diǎn)Figure2-4MultiplecloningsiteofpmirGLOvector

（9）吸去轉(zhuǎn)染液，加入100μL的DMEM（含10%FBS）培養(yǎng)液，37℃，5%培養(yǎng)，分別在24和48h觀察并拍照質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效果圖片。.2重組載體轉(zhuǎn)染pmirGLO載體主要用于檢測(cè)miRNA活性，試驗(yàn)中將miRNA的靶mRNA序列pmirGLO....

本文編號(hào)：3941509