CPP(cystein-richpolycomb-likeproteinor Tesmin/TOS1-like)家族屬于成員數(shù)目較少的一類轉(zhuǎn)錄因子基因家族,含有保守的富含Cystein的CRC結(jié)構(gòu)域,在植物發(fā)育進(jìn)程中,主要參與花發(fā)育、細(xì)胞分裂、分子進(jìn)化等。為了探索CPP轉(zhuǎn)錄因子家族在北美鵝掌楸花發(fā)育中的作用,該文以北美鵝掌楸(Liriodendron tulipifera)為材料,采用RACE技術(shù)克隆出1個CPP-like家族基因,命名為LtTCX2,全長2 866 bp。通過NCBI網(wǎng)站在線分析,ORF長2 424 bp,編碼了807個氨基酸,含2個保守的TSO1-like CXC結(jié)構(gòu)域,分子量為88 699.25 Da,理論等電點為5.83,不穩(wěn)定系數(shù)為62.38,疏水性平均值為-0.619,預(yù)測為親水性蛋白、非跨膜蛋白、核蛋白,不含信號肽及切割位點。氨基酸比對及系統(tǒng)進(jìn)化分析結(jié)果顯示,LtTCX2與其他物種的CPP家族TCX蛋白具有較高的同源性,與亞洲蓮(Nelumbo nucifera)的NnTCX2、胡楊(Populus euphratica)的PeTCX2進(jìn)化關(guān)系最近。熒光定...

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圖1北美鵝掌楸8個組織總RNA提取完整性檢測

將北美鵝掌楸花芽、根、葉、莖、萼片、花瓣、雄蕊、雌蕊共8個組織的總RNA按照多糖多酚植物總RNA提取試劑盒(離心柱型)提取RNA。通過1%凝膠電泳檢測RNA完整性，發(fā)現(xiàn)28S和18SrRNA兩條帶亮度為1.5～2倍，無明顯彌散片狀、條帶消失現(xiàn)象，且OD260/280、OD260....

圖2LtTCX2基因克隆電泳圖

從北美鵝掌楸轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)庫中篩選1個CPP-like家族unigene，總長度3174bp，通過設(shè)計引物依次進(jìn)行中間片段擴(kuò)增、3"RACE擴(kuò)增、5"RACE擴(kuò)增，回收產(chǎn)物進(jìn)行連接轉(zhuǎn)化，挑選陽性克隆送至公司測序，拼接出目的基因的完整序列。鑒于LtTCX2基因片段過長，將其中間片段分....

圖5LtTCX2蛋白二級、三級結(jié)構(gòu)預(yù)測

在NCBI上搜索已經(jīng)發(fā)表的CPP-like家族的蛋白序列，除了氨基酸同源性分析的15個蛋白，還包括胡楊(XP＿011026909.1;XP＿011039720.1;XP＿011019786.1)、銀白楊(TKR83702.1)、擬南芥(NP＿001328549.1;NP＿0013....

圖3北美鵝掌楸LtTCX2蛋白的結(jié)構(gòu)域預(yù)測

將ORF編碼的蛋白序列通過ExPASyProtParam在線分析氨基酸組成、含量、分子量等。LtTCX2蛋白總分子式為C3819H6084N1096O1256S39，分子量為88699.25Da，由807個氨基酸殘基組成，理論等電點為5.83，帶正電荷(Arg+Lys)的氨....

本文編號：3933120