【目的】氣味結(jié)合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆蟲寄主定位、產(chǎn)卵地選擇等行為中發(fā)揮重要作用,克隆與鑒定小菜蛾P(guān)lutella xylostella OBP基因、明確其與配體化合物的結(jié)合特性有助于闡明小菜蛾嗅覺識(shí)別的分子機(jī)制。【方法】利用PCR技術(shù)克隆小菜蛾OBP2,對(duì)獲得的編碼序列全長進(jìn)行信號(hào)肽及跨膜區(qū)域預(yù)測,用DNAMAN與其他昆蟲的OBP2進(jìn)行多序列比對(duì),采用MEGA5.0鄰接法(neighbor-joining method,NJ)構(gòu)建進(jìn)化樹。通過實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同發(fā)育階段和不同組織中的表達(dá)模式。構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET28aPxyl OBP2,進(jìn)行原核表達(dá)及蛋白純化。利用熒光競爭結(jié)合實(shí)驗(yàn)對(duì)Pxyl OBP2蛋白與39種配基化合物的結(jié)合特性進(jìn)行分析�！窘Y(jié)果】成功獲得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登錄號(hào):KT070562)的編碼序列全長,其完整開放閱讀框大小為546 bp,編碼182個(gè)氨基酸,具有氣味結(jié)合蛋白典型的6個(gè)保守半胱氨酸結(jié)合位點(diǎn)。熒光定量PCR結(jié)果表明,發(fā)育表達(dá)模...

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1. 1 供試蟲源
    1. 2 主要試劑
    1. 3 引物的設(shè)計(jì)及合成
    1. 4 總RNA的提取及c DNA第一鏈的合成
    1. 5 小菜蛾氣味結(jié)合蛋白OBP2 全長c DNA序列克隆及重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1. 6 序列分析和進(jìn)化樹構(gòu)建
    1. 7 小菜蛾氣味結(jié)合蛋白基因OBP2 表達(dá)譜分析
    1. 8 重組蛋白表達(dá)條件的優(yōu)化和純化
    1. 9兔抗小菜蛾OBP2 多克隆抗體特異性的Western blot檢測
    1. 10 小菜蛾P(guān)xyl OBP2 重組蛋白的配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)
    1. 11 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果
    2. 1 小菜蛾氣味結(jié)合蛋白基因c DNA的克隆及序列分析
    2.2 Pxyl OBP2氨基酸序列的比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化分析
    2. 3 小菜蛾P(guān)xyl OBP2 的表達(dá)譜分析
    2. 4 p ET-OBP2 重組蛋白的表達(dá)及純化
    2. 5 Pxyl OBP2 與不同氣味分子結(jié)合能力分析
3 討論與結(jié)論



本文編號(hào)：3929659