CRISPR/Cas9是目前最熱門的基因編輯技術,是進行基因敲除的有效手段.斑馬魚是一種常用的研究脊椎動物器官發(fā)育的模式生物,本實驗選取10個斑馬魚前腎表達基因atp1a1a1,atp1a1a.2,atp1a1a.3,atp1a1a.4,atp1a1a.5,pkd2,aqp3a,bmper,isl2a和tbx2a,運用CRISPR/Cas9技術進行基因敲除以研究腎臟發(fā)育.經(jīng)過三代篩選,每個基因獲得了至少一種移碼突變.突變體的初步表型分析顯示,10個基因中只有atp1a1a.2和pkd2基因突變可以導致斑馬魚胚胎發(fā)育缺陷,隱性致死,這與已經(jīng)報道的突變體或基因敲降結果類似.上述結果表明CRISPR/Cas9基因編輯技術可在斑馬魚中高效地進行基因敲除,獲得的突變體為以后深入研究斑馬魚前腎發(fā)育提供了重要材料.

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實驗動物
        1.1.2 質(zhì)粒
        1.1.3 引物
        1.1.4 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 胚胎的收集
        1.2.2 基因gRNA靶位點的選擇
        1.2.3 gRNA的合成
        1.2.4 CRISPR/Cas9活性檢測
        1.2.5 基于CRISPR/Cas9技術的斑馬魚突變體構建
2 結果與分析
    2.1 CRISPR/Cas9gRNA活性檢測
    2.2 子代攜帶突變的F0篩選
    2.3 F1雜合子的篩選
    2.4 斑馬魚前腎表達基因突變純合子的表型鑒定
3 討論



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