發(fā)布時(shí)間：2024-03-09 18:11

　　CRISPR/Cas9是目前最熱門的基因編輯技術(shù),是進(jìn)行基因敲除的有效手段.斑馬魚(yú)是一種常用的研究脊椎動(dòng)物器官發(fā)育的模式生物,本實(shí)驗(yàn)選取10個(gè)斑馬魚(yú)前腎表達(dá)基因atp1a1a1,atp1a1a.2,atp1a1a.3,atp1a1a.4,atp1a1a.5,pkd2,aqp3a,bmper,isl2a和tbx2a,運(yùn)用CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行基因敲除以研究腎臟發(fā)育.經(jīng)過(guò)三代篩選,每個(gè)基因獲得了至少一種移碼突變.突變體的初步表型分析顯示,10個(gè)基因中只有atp1a1a.2和pkd2基因突變可以導(dǎo)致斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育缺陷,隱性致死,這與已經(jīng)報(bào)道的突變體或基因敲降結(jié)果類似.上述結(jié)果表明CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)可在斑馬魚(yú)中高效地進(jìn)行基因敲除,獲得的突變體為以后深入研究斑馬魚(yú)前腎發(fā)育提供了重要材料.

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 質(zhì)粒
        1.1.3 引物
        1.1.4 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 胚胎的收集
        1.2.2 基因gRNA靶位點(diǎn)的選擇
        1.2.3 gRNA的合成
        1.2.4 CRISPR/Cas9活性檢測(cè)
        1.2.5 基于CRISPR/Cas9技術(shù)的斑馬魚(yú)突變體構(gòu)建
2 結(jié)果與分析
    2.1 CRISPR/Cas9gRNA活性檢測(cè)
    2.2 子代攜帶突變的F0篩選
    2.3 F1雜合子的篩選
    2.4 斑馬魚(yú)前腎表達(dá)基因突變純合子的表型鑒定
3 討論



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