熱休克轉(zhuǎn)錄因子1 (HSF1)是一種廣泛存在于真核生物中的調(diào)控因子,在生物體內(nèi)具有多種生理功能。為了探究海洋灘涂生物在耐受高溫過程中HSF1發(fā)揮的作用和分子機(jī)制,進(jìn)一步闡述HSF1的生理功能,文章以縊蟶(Sinonovacula constricta)為實驗材料,利用RACE技術(shù)克隆HSF1基因。結(jié)果顯示,縊蟶HSF1基因的cDNA全長2 026 bp,開放閱讀框(ORF)長1 707 bp,編碼568個氨基酸,5’非編碼區(qū)(UTR)長196 bp,3’UTR長123 bp。氨基酸序列比對及系統(tǒng)進(jìn)化樹結(jié)果顯示縊蟶HSF1基因與美洲牡蠣(Crassostrea virginica)的親緣關(guān)系最為接近,其系統(tǒng)進(jìn)化分析與傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)分類相吻合。熒光定量PCR結(jié)果顯示,HSF1基因在各個組織均有表達(dá),其中在外套膜中的相對表達(dá)量最高,其次是鰓、肝胰腺和水管,在斧足和性腺組織的相對表達(dá)量較低(P<0.05)。熒光定量結(jié)果顯示HSF1基因在急性溫度脅迫后第9小時表達(dá)量較高。推測HSF1基因參與縊蟶的熱應(yīng)激過程,并起到一定作用。

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圖2預(yù)測的縊蟶HSF1三級結(jié)構(gòu)

圖1縊蟶HSF1基因的cDNA序列和氨基酸序列2.3同源性分析

圖4縊蟶HSF1和其他貝類物種HSF1氨基酸序列的多重比對

圖3縊蟶HSF1氨基酸序列與其他物種的氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹3討論

圖5HSF1基因在縊蟶不同組織的表達(dá)情況

HSF1基因廣泛存在于真核生物不同組織中，RT-PCR結(jié)果顯示縊蟶HSF1基因在外套膜中的表達(dá)量最高。外套膜是縊蟶感知外界環(huán)境變化的敏感器官，HSF1基因在縊蟶外套膜中的高表達(dá)，顯示該基因可能在縊蟶產(chǎn)生熱應(yīng)激過程中起關(guān)鍵作用。目前尚未見有關(guān)縊蟶耐熱機(jī)理的研究報道，隨著對熱休克因子....

圖6不同溫度刺激下不同時間點HSF1基因在縊蟶外套膜表達(dá)量

圖5HSF1基因在縊蟶不同組織的表達(dá)情況系統(tǒng)發(fā)育樹顯示縊蟶的HSF1與蝦夷扇貝、長牡蠣、美洲牡蠣聚為一支，表明縊蟶的熱休克因子HSF1可能與其他貝類有相同的功能。qRT-PCR結(jié)果表明HSF1基因在縊蟶所測6個組織中均有表達(dá)且表達(dá)水平不同，推測HSF1在不同組織中有不同的作用....

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