背景及目的:Rab家族蛋白在調(diào)控囊泡運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)揮著重要作用,其中一些Rab蛋白的突變被發(fā)現(xiàn)會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生。目前已經(jīng)鑒定出60多種人類(lèi)Rab家族蛋白,但是其中很多Rab蛋白的生理功能尚不清楚。RAB39B作為Rab家族的一員,在神經(jīng)元中特異性表達(dá)。雖然有細(xì)胞研究提示RAB39B在神經(jīng)元膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中發(fā)揮作用,并參與神經(jīng)突觸的形成和維持,而且RAB39B可能也參與了自噬。但是現(xiàn)在關(guān)于RAB39B的功能,特別是在動(dòng)物整體水平的功能還不清楚。最近的研究發(fā)現(xiàn)發(fā)生在RAB39B編碼基因上的突變與X染色體相關(guān)的智力障礙、帕金森病、自閉癥等有密切相關(guān),但是相關(guān)機(jī)制目前還不明瞭。因此迫切需要揭示RAB39B的生理和病理功能,為疾病的發(fā)病機(jī)制研究和治療提供新的依據(jù)。方法及結(jié)果:在本研究中,我們應(yīng)用TALEN技術(shù)構(gòu)建了Rab3 b基因敲除的小鼠,并證實(shí)了該小鼠中沒(méi)有RAB39B蛋白的表達(dá)。初步觀察發(fā)現(xiàn)Rab39b基因敲除的小鼠能夠正常出生,并在外觀上無(wú)明顯缺陷。我們進(jìn)一步應(yīng)用RNA-seq研究了Rab3 b基因缺失對(duì)于大腦中其他基因表達(dá)的影響,結(jié)果鑒定出30個(gè)顯著上調(diào)的基因和31個(gè)顯著下調(diào)的基因。這些...

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?１?Ｒａｂ蛋白－ＧＴＰ酶循環(huán)??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｒａｂ?ｐｒｏｔｅｉｎ－ＧＴＰａｓｅ?ｃｙｃｌｅｓ??

開(kāi)關(guān)機(jī)制的主要驅(qū)動(dòng)力。在執(zhí)行完功能之后，Ｒａｂ蛋白被ＧＤＰ解離抑制因子??（Ｒａｂ?ＧＤＰ?ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ?ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，?ＲａｂＧＤＩ）從膜上解離下來(lái)，在細(xì)胞質(zhì)中停留至??下一次使用。這一過(guò)程稱(chēng)為ＧＤＩ循環(huán)（圖１．１）?［３］。??Ｒａｂ＃??「?Ｔ??Ｒａｂ?....

圖１．３自閉癥遺傳因素研究的歷史??

發(fā)現(xiàn)自閉癥在同卵雙生子的發(fā)生明顯高于異卵雙生子而證明的。近年來(lái)??隨著基因組研究和二代測(cè)序等先進(jìn)技術(shù)在大規(guī)模人群中的應(yīng)用，現(xiàn)在己經(jīng)在??１０－２５％的病人中發(fā)現(xiàn)了超過(guò)１００個(gè)與自閉癥相關(guān)的易感基因（圖１．３）?［６２’６４］。??１４％?Ｈｕｍａｎ?Ｇｅｎｏｍｅ?ＮＲＸＮａ／?＾....

圖３．?１小鼠與人ＲＡＢ３９Ｂ蛋白的序列比對(duì)??

ＲＡＢ３９Ｂ蛋白的相似度。小鼠和人源的ＲＡＢ３９Ｂ蛋白均帶有２１３個(gè)氨基酸。序??列比較顯示它們之間極度保守，只在第２０５位有所差異：人ＲＡＢ３９Ｂ中為纈氨??酸，小鼠ＲＡＢ３９Ｂ中為異亮氨酸（

圖３．２你於處基因敲除小鼠的構(gòu)建策略??

的第１個(gè)外顯子區(qū)域，誘導(dǎo)突變。所得到的ＫＯ小鼠缺失了“ＧＴ”兩個(gè)堿基（紅色標(biāo)記）。）??通過(guò)顯微注射，我們得到了基因敲除小鼠。該小鼠缺失了?外蛋白編碼區(qū)??的第１０６－１０７位的“ＧＴ”兩個(gè)堿基（圖３．２Ｂ），導(dǎo)致移碼突變：ＲＡＢ３９Ｂ蛋白翻譯??從第３６位開(kāi)始發(fā)生錯(cuò)亂并早期終止....

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