以神經酰胺、鞘磷脂為代表的鞘脂類物質不僅是真核生物膜的必要組分之一,它更可作為信號分子參與眾多細胞進程的調控過程。鞘磷脂合酶與鞘磷脂酶是鞘脂類代謝中至關重要的兩類酶,對于生物體內神經酰胺-鞘磷脂的穩(wěn)態(tài)具有重要的調節(jié)作用。本文以水稻重要害蟲褐飛虱作為研究對象,克隆并鑒定了褐飛虱體內鞘磷脂合酶與鞘磷脂酶同源基因,并基于RNA干擾技術,對兩種酶的生物學功能進行了初步研究。主要研究成果如下:1.在褐飛虱體內克隆并鑒定了2個鞘磷脂合酶同源基因NlSMSL1和NlSMSL2,研究其時空表達特性,并驗證其體內酶活功能。其中NlSMSL1長1434 bp,編碼477個氨基酸,在褐飛虱成蟲與生殖器官高表達;NlSMSL2長1188 bp,編碼395個氨基酸,在褐飛虱成蟲與馬氏管高表達。通過RNA干擾技術抑制NlSMSL1表達后,褐飛虱體內神經酰胺與鞘磷脂含量無顯著變化;抑制NlSMSL2表達后,神經酰胺類物質總含量極顯著上升,尤其對d18:0/18:1神經酰胺和d18:1/18:0神經酰胺影響最顯著。2.通過顯微注射雙鏈RNA(dsRNA),在褐飛虱體內下調NlSMSL1和NlSMSL2的表達,發(fā)現(xiàn)Nl...

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
第一章 文獻綜述
    1.1 水稻及其重要害蟲褐飛虱的研究概述
    1.2 鞘脂類物質的功能作用
        1.2.1 神經酰胺
        1.2.2 鞘磷脂
    1.3 鞘磷脂合酶家族的研究概述
        1.3.1 鞘磷脂合酶家族的發(fā)現(xiàn)
        1.3.2 鞘磷脂合酶的結構與功能
        1.3.3 鞘磷脂合酶相關蛋白
    1.4 鞘磷脂酶的研究概述
        1.4.1 酸性鞘磷脂酶
        1.4.2 中性鞘磷脂酶
        1.4.3 堿性鞘磷脂酶
    1.5 研究目的與意義
第二章 褐飛虱鞘磷脂合酶家族同源基因NlSMSL1和NlSMSL2 的發(fā)掘
    2.1 材料與方法
        2.1.1 供試昆蟲與水稻
        2.1.2 試劑與儀器
        2.1.3 NlSMSL1和NlSMSL2 的克隆、分析與時空表達
        2.1.4 NlSMSL1和NlSMSL2 基因dsRNA的合成
        2.1.5 顯微注射法與基因干擾效率檢測
        2.1.6 褐飛虱體內神經酰胺與鞘磷脂含量測定
    2.2 結果與分析
        2.2.1 NlSMSL1和NlSMSL2 的克隆與鑒定
        2.2.2 NlSMSL1和NlSMSL2 的時空表達
        2.2.3 NlSMSL1和NlSMSL2的RNA干擾效率
        2.2.4 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱神經酰胺與鞘磷脂含量的影響
    2.3 討論
第三章 NlSMSL1和NlSMSL2 在褐飛虱生長生殖過程中的作用
    3.1 材料與方法
        3.1.1 供試昆蟲與水稻
        3.1.2 試劑與儀器
        3.1.3 各生物學測定實驗方法
        3.1.4 qRT-PCR法對卵黃原蛋白相關基因的檢測
        3.1.5 褐飛虱體內游離脂肪酸含量的測定
        3.1.6 Western Blot法對褐飛虱卵黃原蛋白的檢測
    3.2 結果與分析
        3.2.1 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱若蟲、雌成蟲存活率的影響
        3.2.2 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱成蟲體重的影響
        3.2.3 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱雌蟲體內游離脂肪酸的影響
        3.2.4 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱產卵量、孵化率的影響
        3.2.5 NlSMSL1和NlSMSL2 對褐飛虱生殖器官發(fā)育的影響
        3.2.6 NlSMSL1 對褐飛虱體內卵數(shù)與卵黃原蛋白的影響
    3.3 討論
第四章 褐飛虱鞘磷脂酶同源基因的初步研究
    4.1 材料與方法
    4.2 結果與分析
        4.2.1 褐飛虱鞘磷脂酶同源基因的克隆與鑒定
        4.2.2 NlSMase1⁴ 的時空表達
        4.2.3 NlSMase1⁴的RNA干擾效率
        4.2.4 NlSMase1⁴ 對褐飛虱雌蟲卵巢發(fā)育的影響
        4.2.5 NlSMase4 對褐飛虱雌蟲卵巢轉錄組的影響
    4.3 討論
第五章 總結與展望
    5.1 研究總結
    5.2 本研究的創(chuàng)新之處
    5.3 未來研究展望
參考文獻
附錄1



本文編號：3872963