膜聯(lián)蛋白(Annexin)是一類(lèi)Ca2+及磷脂結(jié)合蛋白,在非生物逆境脅迫方面發(fā)揮重要作用,但木本模式植物楊樹(shù)膜聯(lián)蛋白基因的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)RT-PCR與RACE相結(jié)合的方法從毛果楊(Populus trichocarpa)克隆獲得膜聯(lián)蛋白3 (Ptann3)基因c DNA序列,分析發(fā)現(xiàn)編碼蛋白質(zhì)Ptann3與其他植物膜聯(lián)蛋白高度同源,具有過(guò)氧化物酶活性結(jié)構(gòu)域、S3氧化還原反應(yīng)結(jié)構(gòu)域、GTP結(jié)合結(jié)構(gòu)域及鈣結(jié)合位點(diǎn)。構(gòu)建原核表達(dá)載體p ET-28a-Ptann3,轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21 (DE3)中表達(dá)分析,Ptann3蛋白分子量35.6 kD,分析表明Ptann3蛋白具有過(guò)氧化物酶與ATPase活性。qPCR分析結(jié)果顯示,Ptann3基因在根、上部莖、下部莖、葉柄、幼葉和成葉中均有表達(dá),在幼葉中表達(dá)量最高,在葉柄和根中表達(dá)量次之,成葉和莖中表達(dá)量最低。此外,研究發(fā)現(xiàn)低溫、ABA、PEG6000、H2O2和NaCl脅迫處理可顯著影響Ptann3基因的表達(dá),推測(cè)楊樹(shù)Ptann3基因在非生物逆境脅迫中發(fā)揮重要作用,研究結(jié)果對(duì)楊樹(shù)抗逆遺傳改良具有重要意義。

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【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 基因克隆
    1.2 Ptann3蛋白分析
        1.2.1 Ptann3理化性質(zhì)
        1.2.2 Ptann3蛋白信號(hào)肽、磷酸化位點(diǎn)、細(xì)胞定位
        1.2.3 Ptann3結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    1.3 氨基酸比對(duì)以及進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建
    1.4 蛋白表達(dá)與純化
    1.5 蛋白酶活測(cè)定
    1.6 組織表達(dá)分析
    1.7 脅迫分析
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料
    3.2 材料預(yù)處理
    3.3 RNA提取及cDNA的合成
    3.4 基因克隆與5'和3'非編碼區(qū)擴(kuò)增
    3.5 DNA片段測(cè)序、序列分析及Ptann3基因生物信息學(xué)分析
    3.6 熒光定量PCR組織表達(dá)與脅迫下Ptann3基因表達(dá)分析
    3.7 Ptann3蛋白表達(dá)、純化及酶活性檢測(cè)
作者貢獻(xiàn)



本文編號(hào)：3866383