WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物最大的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)子家族之一,是信號(hào)網(wǎng)絡(luò)不可缺少的部分,調(diào)節(jié)許多植物生物學(xué)進(jìn)程,包括生物和非生物逆境脅迫響應(yīng)等。本研究在中間錦雞兒干旱轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選獲得含有完整的WRKY結(jié)構(gòu)域的CiWRKYs基因序列53條,在此基礎(chǔ)上展開(kāi)了下列研究:(1)根據(jù)WRKY保守結(jié)構(gòu)域的個(gè)數(shù)和鋅指結(jié)構(gòu)的特點(diǎn),將53個(gè)Ci WRKYs蛋白分成了3類(lèi),其中Group I、Group II和Group III分別包括11、34和8個(gè)Ci WRKYs。Group II根據(jù)系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)將其分成了5個(gè)亞族,即IIa、IIb、IIc、IId和IIe,分別有5、6、13、4和6個(gè)CiWRKYs。(2)結(jié)合RACE克隆等最終獲得28個(gè)具有完整開(kāi)放閱讀框(ORF)的CiWRKYs基因序列。并進(jìn)一步對(duì)28個(gè)CiWRKYs蛋白的理化性質(zhì)、氨基酸序列、二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)分析。同時(shí)將Ci WRKYs與其它8種豆科植物的WRKYs進(jìn)行了比較分析,結(jié)果表明,中間錦雞兒WRKYs與蒺藜苜蓿的WRKYs親緣關(guān)系可能較近。與擬南芥的WRKYs進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),Group III蛋白呈較低的相似性;Group IIa和...

【文章頁(yè)數(shù)】：113 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子
        1.1.1 WRKY轉(zhuǎn)錄因子結(jié)構(gòu)
        1.1.2 WRKY家族基因鑒定
        1.1.3 WRKY轉(zhuǎn)錄因子功能研究
    1.2 中間錦雞兒分子機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.1 中間錦雞兒抵抗逆境的分子機(jī)制研究進(jìn)展
        1.2.2 中間錦雞兒WRKY功能研究
    1.3 本課題的研究?jī)?nèi)容及其意義
    1.4 本課題的技術(shù)路線(xiàn)
2 中間錦雞兒WRKY家族基因的分析和鑒定
    2.1 材料
        2.1.1 植物種子
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑及相關(guān)溶液配制
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 方法
        2.2.1 中間錦雞兒培養(yǎng)
        2.2.2 中間錦雞兒RNA提取及cDNA合成
        2.2.3 中間錦雞兒WRKY基因鑒定及理化性質(zhì)
        2.2.4 CiWRKYs蛋白的保守結(jié)構(gòu)域及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.2.5 CiWRKYs蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)和三級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        2.2.6 其它豆科類(lèi)植物的WRKYs家族分析
        2.2.7 中間錦雞兒與其他植物的WRKYs相似性比對(duì)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 CiWRKYs基因序列分析及命名
        2.3.2 CiWRKYs基因全長(zhǎng)序列驗(yàn)證
        2.3.3 CiWRKYs的理化性質(zhì)分析
        2.3.4 CiWRKYs蛋白的結(jié)構(gòu)域及系統(tǒng)進(jìn)化分析
        2.3.5 CiWRKYs蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果及分析
        2.3.6 CiWRKYs蛋白的三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)結(jié)果及分析
        2.3.7 其它豆科類(lèi)植物WRKY家族基因的分析結(jié)果
        2.3.8 中間錦雞兒WRKY家族蛋白與其他植物的比對(duì)結(jié)果及分析
    2.4 討論及結(jié)論
        2.4.1 CiWRKYs蛋白結(jié)構(gòu)域和進(jìn)化分析
        2.4.2 CiWRKYs與擬南芥WRKYs氨基酸組成比較
        2.4.3 中間錦雞兒等豆科植物WRKYs與擬南芥WRKYs比較
3 中間錦雞兒WRKY家族基因的亞細(xì)胞定位及其表達(dá)譜
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料及載體
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑及培養(yǎng)基配制
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 方法
        3.2.1 植物培養(yǎng)
        3.2.2 CiWRKY26和CiWRKY28-1的克隆
        3.2.3 PCR產(chǎn)物膠回收
        3.2.4 目的片段與載體的連接及連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化
        3.2.5 菌落PCR檢測(cè)
        3.2.6 GFP融合表達(dá)載體構(gòu)建
        3.2.7 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        3.2.8 亞細(xì)胞定位
        3.2.9 不同組織部位表達(dá)
        3.2.10 干旱脅迫處理生理指標(biāo)的檢測(cè)
        3.2.11 不同非生物脅迫處理、取樣及檢測(cè)
    3.3 結(jié)果及分析
        3.3.1 CiWRKY26和CiWRKY28-1克隆以及GFP融合表達(dá)載體構(gòu)建
        3.3.3 CiWRKY26和CiWRKY28-1的亞細(xì)胞定位研究
        3.3.4 CiWRKYs基因不同組織部位表達(dá)譜分析
        3.3.5 CiWRKYs基因?qū)Ω珊得{迫處理的響應(yīng)
        3.3.6 CiWRKYs基因?qū)ζ渌巧锩{迫處理的響應(yīng)
        3.3.7 CiWRKYs基因?qū)Ψ巧锩{迫處理的響應(yīng)總結(jié)分析
    3.4 討論
        3.4.1 CiWRKYs亞細(xì)胞定位
        3.4.2 CiWRKYs的組織表達(dá)和對(duì)不同環(huán)境脅迫的響應(yīng)
4.中間錦雞兒CiWRKY75-1和CiWRKY28-1的功能研究
    4.1 材料
        4.1.1 植物材料及載體
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)主要試劑及培養(yǎng)基配制
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 方法
        4.2.1 基因克隆和植物表達(dá)載體構(gòu)建
        4.2.2 擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.2.3 CiWRKY75-1的功能檢測(cè)
        4.2.4 CiWRKY28-1的克隆和功能檢測(cè)
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 過(guò)表達(dá)CiWRKY75-1減弱了擬南芥對(duì)鹽脅迫的耐受能力
        4.3.2 過(guò)表達(dá)CiWRKY75-1增強(qiáng)了ABA對(duì)擬南芥種子萌發(fā)的抑制作用
        4.3.3 CiWRKY28-1基因結(jié)構(gòu)分析
        4.3.4 過(guò)表達(dá)CiWRKY28-1擬南芥的篩選與鑒定
        4.3.5 過(guò)表達(dá)CiWRKY28-1減弱擬南芥對(duì)干旱脅迫的耐受能力
        4.3.6 過(guò)表達(dá)CiWRKY28-1增加擬南芥對(duì)ABA的耐受性
    4.4 討論
        4.4.1 CiWRKY75-1參與調(diào)控植物對(duì)鹽和ABA的響應(yīng)
        4.4.2 中間錦雞兒CiWRKY28-1參與干旱和ABA響應(yīng)
5.結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3862701