將小鼠Ogg1(mOgg1)基因克隆至pET-28a(+)原核表達(dá)載體上,分析其相關(guān)的生物信息學(xué)特性.運(yùn)用分子克隆的方法,獲得重組質(zhì)粒pET28a-mOgg1;經(jīng)同源性分析證實(shí)與NCBI基因庫(kù)中mOgg1基因相似度為100%;mOgg1基因可翻譯成345個(gè)氨基酸序列,翻譯后的蛋白不存在N-糖基化位點(diǎn)、跨膜螺旋區(qū)域,不含信號(hào)肽且無(wú)信號(hào)肽剪切位點(diǎn),但含有31個(gè)磷酸化位點(diǎn);運(yùn)用在線軟件對(duì)mOgg1蛋白進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析并建立蛋白的3D結(jié)構(gòu),發(fā)現(xiàn)在該蛋白鏈上含有48%α螺旋、10%β折疊.成功獲得了pET28a-mOgg1重組質(zhì)粒,并對(duì)重組蛋白進(jìn)行Western-blot鑒定,從基因及氨基酸組成上分析該蛋白的特性,由此探討mOgg1基因及蛋白表達(dá)相關(guān)的生物信息學(xué)特性.

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.1.2 儀器與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 小鼠肝組織RNA提取以及cDNA獲取
        1.2.2 mOgg1基因的克隆及測(cè)序分析
        1.2.3 mOgg1蛋白序列分析及蛋白的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與功能分析
        1.2.4 pET28a-mOgg1表達(dá)蛋白的Western-blot鑒定
2 結(jié)果
    2.1 mOgg1基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物
    2.2 重組質(zhì)粒pET28a-mOgg1 PCR鑒定結(jié)果
    2.3 mOgg1基因測(cè)序結(jié)果及其不同物種同源性分析
    2.4 mOgg1基因氨基酸序列分析
    2.5 抗原肽分析
    2.6 mOgg1蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
    2.7 重組質(zhì)粒pET28a-mOgg1表達(dá)蛋白的Western-blot鑒定
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