口蹄疫(Foot-and-Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth disease Virus,FMDV)引起豬、牛和羊等偶蹄動(dòng)物感染的一種重大烈性傳染病,是《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃(2012-2020)》中的三個(gè)單列病種之一。目前,滅活疫苗的免疫接種是預(yù)防、控制和凈化口蹄疫的主要手段。但口蹄疫病毒對(duì)熱極其敏感(尤其是O型口蹄疫病毒),溫度升高容易誘導(dǎo)病毒粒子解離成五聚體亞單位(12S)而導(dǎo)致疫苗的有效抗原(146S)含量降低,從而影響疫苗的免疫保護(hù)效力,進(jìn)而影響口蹄疫的有效防控。因此,面對(duì)目前的市場(chǎng)需求,急需發(fā)展一種耐熱特性優(yōu)良的口蹄疫鑒別診斷疫苗,有效提升我國(guó)口蹄疫疫苗質(zhì)量,滿足國(guó)家口蹄疫免疫凈化防控的技術(shù)需求。為了發(fā)展熱穩(wěn)定的口蹄疫鑒別診斷疫苗候選毒株,本論文從以下3部分進(jìn)行研究:1.以實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的免疫原性優(yōu)良的O型口蹄疫標(biāo)記病毒感染性克隆pO/TAA為骨架,在結(jié)構(gòu)蛋白引入單個(gè)或多個(gè)氨基酸突變,分別構(gòu)建了10種基因修飾的口蹄疫全長(zhǎng)重組質(zhì)粒。全長(zhǎng)質(zhì)粒經(jīng)Not I線化后分別轉(zhuǎn)染表達(dá)T7 RNA聚合酶的BSR/T7細(xì)胞,共成功拯救了9株重組病...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略表
第一章 引言
    1.1 口蹄疫
    1.2 口蹄疫病毒
    1.3 口蹄疫的流行現(xiàn)狀
    1.4 口蹄疫疫苗的分類
        1.4.1 傳統(tǒng)疫苗
        1.4.2 新型疫苗
    1.5 熱穩(wěn)定性提高的口蹄疫疫苗
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 口蹄疫病毒O型耐熱突變株的構(gòu)建和鑒定
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞、病毒和質(zhì)粒
        2.1.2 主要試劑和儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 突變位點(diǎn)的設(shè)計(jì)與質(zhì)粒合成
        2.2.2 半長(zhǎng)質(zhì)粒與pO/TAA全長(zhǎng)質(zhì)粒的酶切與回收
        2.2.3 連接
        2.2.4 小提質(zhì)粒
        2.2.5 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.2.6 轉(zhuǎn)染
        2.2.7 拯救病毒的鑒定
        2.2.8 電鏡觀察
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.3.2 重組病毒的拯救
        2.3.3 拯救病毒的鑒定
        2.3.4 電鏡觀察
    2.4 討論
第三章 重組口蹄疫病毒的生物學(xué)特性和穩(wěn)定性分析
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞與病毒
        3.1.2 試劑和儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 蝕斑形成試驗(yàn)
        3.2.2 病毒生長(zhǎng)曲線
        3.2.3 熱失活實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 酸失活實(shí)驗(yàn)
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 蝕斑形成試驗(yàn)
        3.3.2 病毒生長(zhǎng)曲線
        3.3.3 熱失活實(shí)驗(yàn)
        3.3.4 酸失活實(shí)驗(yàn)
    3.4 討論
第四章 耐熱重組病毒的免疫原性研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 細(xì)胞、病毒和動(dòng)物
        4.1.2 主要試劑、耗材和儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 疫苗制備與動(dòng)物免疫
        4.2.2 病毒中和試驗(yàn)
        4.2.3 重組病毒疫苗的保存期試驗(yàn)
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 病毒中和試驗(yàn)結(jié)果
        4.3.2 重組病毒疫苗的保存期試驗(yàn)
    4.4 討論
第五章 全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3839762