目的探討中樞神經(jīng)特異蛋白(S100β)基因單核苷酸多態(tài)性對微小RNA(miRNA)靶向調(diào)控的影響。方法利用Target Scan在線軟件,尋找調(diào)控S100β基因的miRNA及其配對結(jié)合位點。構(gòu)建S100β基因rs9722位點不同基因型載體并鑒定。將構(gòu)建的S100β基因rs9722位點不同基因型載體(S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722Cmut)與miRNA模擬物(miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p)兩兩組合共轉(zhuǎn)染293T細胞,采用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測各組合培養(yǎng)液上清熒光素酶活性。取對數(shù)生長期人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞,分別轉(zhuǎn)染miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p,采用實時熒光定量PCR法檢測相應(yīng)miRNA表達,采用Western blotting法檢測S100β表達。結(jié)果 miR-340-3p、miR-6827-3p的5’-CUCUGCC-3’序列與S100β基因3’非編碼區(qū)(3’UTR)的5’-GAGACGG-3’序...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 miRNA與S100β基因靶向調(diào)控關(guān)系預(yù)測
    1.3 S100β基因rs9722位點不同基因型載體構(gòu)建
    1.4 雙熒光素酶活性檢測
    1.5 細胞轉(zhuǎn)染
    1.6 miRNA表達檢測
    1.7 S100β表達檢測
    1.8 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 miRNA與S100β基因的靶向調(diào)控關(guān)系
    2.2 S100β基因rs9722位點不同基因型載體鑒定
    2.3 各組雙熒光素酶活性比較
    2.4 各組轉(zhuǎn)染后相應(yīng)miRNA表達比較
    2.5各組轉(zhuǎn)染后S100β表達比較
3 討論



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