水稻條斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染寄主水稻,引起水稻細菌性條斑病(Bacterial leaf streak,BLS),在亞洲水稻種植區(qū)引起嚴重減產(chǎn)。Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)編碼的III型分泌系統(tǒng)(type III secretion system,T3SS)將效應蛋白運送到寄主細胞中,并激發(fā)水稻的抗(感)性。T3SS作為Xoc關(guān)鍵毒性因子,是Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡的重要組成部分,但尚且缺乏有效解析Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡的誘導表達體系。為了更好地解析Xoc毒性調(diào)控網(wǎng)絡,本研究建立了一套從轉(zhuǎn)錄水平到蛋白表達水平的Xoc T3SS誘導表達檢測體系。為建立T3SS轉(zhuǎn)錄水平報道檢測體系,本研究利用gusA報道基因構(gòu)建獲得啟動子探針載體pHG2-hrpGxoc、pHG2-hrpXoc、pHG1-hrcCxoc。通過啟動子GUS活性測定和熒光定量PCR,初步證明了這套轉(zhuǎn)錄水平報道檢測體系在XOM3誘導條件下運行和解析基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控表達情況。為進一步確定這套體系可以精確分析基因調(diào)控表達,將上述啟動子探針載體導入調(diào)控基因trh、zur、l...

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 水稻條斑病和水稻條斑病菌
        1.1.1 水稻條斑病的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 水稻條斑病的分布及危害
        1.1.3 水稻條斑病菌
        1.1.4 水稻條斑病的危害及防治方法
    1.2 水稻條斑病菌的毒性因子
        1.2.1 胞外酶類
        1.2.2 胞外多糖
        1.2.3 脂多糖
        1.2.4 Ⅲ型分泌系統(tǒng)和效應蛋白
    1.3 水稻條斑病菌毒性調(diào)控網(wǎng)絡
        1.3.1 群集感應系統(tǒng)
        1.3.2 環(huán)鳥苷二磷酸信號激發(fā)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控
        1.3.3 雙組份信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的毒性調(diào)控
        1.3.4 hrp基因表達調(diào)控系統(tǒng)
        1.3.5 轉(zhuǎn)錄后的毒性基因調(diào)控
    1.4 T3SS基因表達檢測體系的研究進展
        1.4.1 T3SS基因轉(zhuǎn)錄表達檢測體系的研究進展
        1.4.2 T3SS基因蛋白表達檢測體系的研究進展
    1.5 研究內(nèi)容和意義
第二章 水稻條斑病菌T3SS基因轉(zhuǎn)錄水平報道檢測體系的建立
    引言
    2.1 材料與方法
        2.1.1 菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 引物設(shè)計與合成
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 菌株的活化、培養(yǎng)和保存
        2.1.5 質(zhì)粒的提取
        2.1.6 分子遺傳操作體系
        2.1.7 過渡載體和骨架載體的構(gòu)建
        2.1.8 啟動子探針載體的構(gòu)建
        2.1.9 黃單胞菌感受態(tài)制備及電轉(zhuǎn)化
        2.1.10 實驗作物品種與生長條件
        2.1.11 注射接種
        2.1.12 XOM3 誘導條件下的GUS活性定量測定
        2.1.13 植物組織中的GUS染色方法
        2.1.14 植物組織中的GUS活性定量測定方法
        2.1.15 植物組織中細菌生長量的測定
        2.1.16 實時熒光定量PCR
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 T3SS基因啟動子探針載體的構(gòu)建
        2.2.2 T3SS基因啟動子活性的誘導表達檢測
        2.2.3 啟動子探針載體應用于基因調(diào)控表達的分析
        2.2.4 已知毒性調(diào)控子基因調(diào)控T3SS基因表達的分析
        2.2.5 啟動子探針載體應用于植物組織中基因表達調(diào)控的分析
    2.3 討論
第三章 水稻條斑病菌T3SS基因蛋白表達檢測體系的建立
    引言
    3.1 材料與方法
        3.1.1 菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 引物設(shè)計與合成
        3.1.3 培養(yǎng)基
        3.1.4 菌株的活化、培養(yǎng)和保存
        3.1.5 質(zhì)粒的提取
        3.1.6 分子遺傳操作體系
        3.1.7 過渡載體和骨架載體的構(gòu)建
        3.1.8 蛋白表達載體的構(gòu)建
        3.1.9 黃單胞菌感受態(tài)制備及電轉(zhuǎn)化
        3.1.10 實驗作物品種與生長條件
        3.1.11 注射接種
        3.1.12 蛋白免疫雜交技術(shù)(Western blot)
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 T3SS基因蛋白表達載體的構(gòu)建
        3.2.2 T3SS蛋白表達檢測體系的建立
        3.2.3 T3SS蛋白表達檢測體系應用于毒性調(diào)控網(wǎng)絡的分析
        3.2.4 T3SS蛋白表達檢測體系應用于基因功能互補的分析
    3.3 討論
第四章 全文總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 創(chuàng)新點
    4.3 展望
參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間已發(fā)表或錄用的論文



本文編號：3827723