目的:單基因糖尿病是單一基因突變引起的一種特殊類型的糖尿病。以胰島素的基因突變?yōu)槔?目前為止,人們已發(fā)現(xiàn)了超過50種胰島素的基因突變可導(dǎo)致早發(fā)型的糖尿病。天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院的內(nèi)分泌代謝科為深入了解單基因糖尿病,開展了一項(xiàng)有關(guān)單基因糖尿病的篩查工作。為探究不同的胰島素基因(INS gene)突變的致病機(jī)制,本實(shí)驗(yàn)研究了其折疊、分泌功能。其次,既往的研究表明,突變所導(dǎo)致的錯(cuò)誤折疊的胰島素原可能通過與其共存的野生型胰島素原而產(chǎn)生異常作用,這會(huì)影響其折疊、加工和分泌,從而進(jìn)一步加劇了胰島素的缺乏,這一現(xiàn)象即為錯(cuò)誤折疊的胰島素原對野生型胰島素原的顯性負(fù)效應(yīng)。因此本研究根據(jù)以上推測,設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案。方法:首先,制備帶有Myc標(biāo)簽的野生型胰島素原/突變胰島素原的過表達(dá)質(zhì)粒,然后將其分別轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后收取細(xì)胞及培養(yǎng)基中的蛋白,統(tǒng)計(jì)胰島素原含量并計(jì)算其分泌率,同時(shí)將細(xì)胞中的蛋白兩等分,一半不加特殊處理,另一半加還原試劑以打開二硫鍵,比較不同胰島素原存在的錯(cuò)誤折疊情況。其次,將Myc標(biāo)記的的胰島素原與未標(biāo)記的野生型胰島素原共同轉(zhuǎn)染入293T細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,用裂解效果溫和型的細(xì)胞...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
1.對象和方法
    1.1 單基因糖尿病篩查標(biāo)準(zhǔn)
    1.2 材料和儀器
    1.3 研究方法
2.結(jié)果
    2.1 不同的胰島素基因突變所致的臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度不同
    2.2 胰島素基因突變可導(dǎo)致突變胰島素原的錯(cuò)誤折疊增多及分泌能力下降
    2.3 突變胰島素原能與野生型胰島素原形成分子間作用
    2.4 突變胰島素原可影響野生型胰島素原的折疊和分泌
    2.5 突變胰島素原主要定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)且可以影響Ins1細(xì)胞中胰島素的合成
3.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述 胰島素基因及其突變與單基因糖尿病的關(guān)系
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷



本文編號：3827708