化療是目前癌癥治療中最為有效的三大傳統(tǒng)治療手段之一,其中,金屬鉑類化合物是目前應用最廣泛的一類化療藥物,在臨床中參與一半以上的癌癥治療。然而,金屬鉑類化合物由于缺乏選擇性,在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時,對正常組織或器官產(chǎn)生較大的毒副作用;同時,溶解度低、血液循環(huán)時間短、易被代謝等問題導致其生物利用率較低;更為嚴重的是,先天或后天因多次化療產(chǎn)生的耐藥性,極大地限制了鉑類藥物的治療效果。作為一種能從遺傳物質(zhì)基礎上治愈疾病的新興技術,基因療法在癌癥治療中發(fā)揮著越來越重要的作用。相比于化療藥物,基因藥物靶點明確、選擇性好、能夠特異性調(diào)控各種致病基因的表達,且無耐藥性。因此,針對腫瘤治療中的耐藥性和異質(zhì)性等問題,通過聯(lián)合基因治療和鉑藥化療,在基因水平調(diào)控癌細胞增殖狀態(tài)的同時聯(lián)合化療藥物,具有良好的臨床應用前景。考慮到小分子鉑藥用于化療所面臨的問題以及基因藥物在體內(nèi)循環(huán)過程中易被降解、清除等不利因素,通過簡單的設計制備鉑藥和基因藥物的共遞送系統(tǒng)用于實現(xiàn)化療和基因治療的協(xié)同作用具有重要意義。近年來,納米藥物遞送系統(tǒng)已在基礎研究和臨床應用中展現(xiàn)出諸多優(yōu)勢,如改善藥物溶解性、延長藥物血液循環(huán)時間、增加靶向部位...

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【學位級別】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 癌癥治療
        1.1.1 鉑藥化療
        1.1.2 基因治療
        1.1.3 聯(lián)合鉑藥化療和基因治療
    1.2 聯(lián)合治療納米遞送載體
        1.2.1 無機納米載體
        1.2.2 高分子納米載體
        1.2.3 其它載體
    1.3 本論文選題依據(jù)和研究內(nèi)容
第二章 含鉑聚前藥納米載體用于光控基因遞送及協(xié)同逆轉腫瘤耐藥性
    2.1 引言
    2.2 實驗材料及測試方法
        2.2.1 主要藥品及化學試劑
        2.2.2 主要生化試劑
        2.2.3 測試儀器及方法
    2.3 實驗方法
        2.3.1 四價光敏鉑trans,trans,trans-[Pt(N₃)₂(OH)₂(py)(NH₃)] (Pt(Ⅳ)的合成
        2.3.2 光敏鉑前藥骨架的陽離子聚合物(PtCP)的合成
        2.3.3 合成羅丹明B(RhB)標記的PtCP (RhB-PtCP)
        2.3.4 端氨基聚乙二醇mPEG_2k-NH₂的合成
        2.3.5 合成聚乙二醇接枝的透明質(zhì)酸(HA-PEG,HP)
        2.3.6 光源及光照條件
        2.3.7 光響應主鏈含鉑陽離子聚合物納米粒(NP_PtCP)的制備及表征
        2.3.8 PtCP的緩沖能力
        2.3.9 NP₍PtCP/si(c-fos))的制備及表征
        2.3.10 透明質(zhì)酸遮蔽的復合納米粒CNP₍PtCP/si(c-fos))的制備及表征
        2.3.11 抗反離子能力
        2.3.12 CNP₍PtCP/si(c-fos))的穩(wěn)定性
        2.3.13 Pt(Ⅳ)對基因的安全性
        2.3.14 CNP₍PtCP/si(c-fos))的光敏感性
        2.3.15 檢測疊氮自由基(N3
·)
        2.3.16 疊氮自由基(N3
·)對基因的安全性
        2.3.17 Pt及si(c-fos)的光響應性釋放
        2.3.18 細胞培養(yǎng)
        2.3.19 NP₍PtCP/si(c-fos))及CNP₍PtCP/si(c-fos))的細胞內(nèi)吞比較
        2.3.20 疊氮自由基(N3·)誘導溶酶體破裂
        2.3.21 光控溶酶體逃逸及基因卸載
        2.3.22 細胞毒性評價
        2.3.23 聯(lián)合用藥指數(shù)(Combination Index (CI))
        2.3.24 細胞凋亡
        2.3.25 Western blotting分析
        2.3.26 細胞Pt內(nèi)吞
        2.3.27 確立腫瘤模型
        2.3.28 Pt的體內(nèi)分布
        2.3.29 抑瘤實驗
        2.3.30 腫瘤組織氧化型自由基檢測及腫瘤細胞溶酶體破裂
        2.3.31 血常規(guī)及生化指標分析
        2.3.32 組織學及免疫熒光分析
        2.3.33 TUNEL檢測
    2.4 結果與討論
        2.4.1 四價光敏鉑前藥Pt(Ⅳ)的合成
        2.4.2 PtCP的合成
        2.4.3 mPEG_2k-NH₂的合成
        2.4.4 聚乙二醇接枝的透明質(zhì)酸(HP)的合成
        2.4.5 NP_PtCP,NP₍PtCP/si(c-fos))及CNP_PtCP/sic-fos)的制備及表征
        2.4.6 CNP₍PtCP/si(c-fos))的穩(wěn)定性
        2.4.7 Pt(Ⅳ)對基因的安全性分析
        2.4.8 Pt(Ⅳ)和PtCP的光響應性
        2.4.9 CNP₍PtCP/si(c-fos))的光敏性
        2.4.10 CNP₍PtCP/si(c-fos))的靶向性
        2.4.11 疊氮自由基(N3·)的產(chǎn)生
        2.4.12 N3
·的安全性
        2.4.13 N3
·輔助溶酶體逃逸及光控基因卸載
        2.4.14 CNP₍PtCP/si(c-fos))的體外抗癌效果評價
        2.4.15 CNP₍PtCP/si(c-fos))的抗癌機理分析
        2.4.16 細胞凋亡檢測
        2.4.17 動物水平抑瘤實驗
        2.4.18 血液生化指標及H&E染色
        2.4.19 機制研究
    2.5 本章結論
第三章 近紅外光激活的多模式成像診療系統(tǒng)用于癌癥聯(lián)合治療
    3.1 引言
    3.2 實驗材料及測試方法
        3.2.1 主要藥品及化學試劑
        3.2.2 主要生化試劑
        3.2.3 測試儀器及方法
    3.3 實驗方法
        3.3.1 四價光敏鉑trans,trans,trans-[Pt(N₃)₂(OH)₂(py)(NH₃)] (Pt(Ⅳ)的合成
        3.3.2 光敏鉑前藥骨架的聚合物(PtP)的合成
        3.3.3 上轉換納米粒(UCNP)的制備及表征
        3.3.4 UCNP@Pt的制備及表征
        3.3.5 UCNP@Pt@siRNA的制備及表征
        3.3.6 光源
        3.3.7 UCNP@Pt@siRNA的近紅外光響應性
        3.3.8 UCNP@Pt@siRNA的近紅外光響應性釋放
        3.3.9 細胞培養(yǎng)
        3.3.10 UCNP@Pt@siRNA的細胞內(nèi)吞
        3.3.11 細胞毒性評價
        3.3.12 細胞凋亡
        3.3.13 Western blotting分析
        3.3.14 確立腫瘤模型
        3.3.15 多模式成像
        3.3.16 抑瘤實驗
        3.3.17 血常規(guī)及生化指標分析
        3.3.18 組織學及免疫熒光分析
        3.3.19 TUNEL檢測
    3.4 結果與討論
        3.4.1 Pt(Ⅳ)的合成
        3.4.2 PPt的合成
        3.4.3 UCNP@Pt@siRNA的制備及表征
        3.4.4 UCNP@Pt@siRNA的光敏感性
        3.4.5 UCNP@Pt@siRNA的細胞內(nèi)吞
        3.4.6 UCNP@Pt@siPlk1的體外抗癌效果評價
        3.4.7 MR/CT/UCL三模式成像
        3.4.8 動物水平抑瘤實驗
        3.4.9 血液生化指標及H&E染色
        3.4.10 機制研究
    3.5 本章結論
第四章 鏈消除聚鉑高分子用于高效CRISPR/Cas9基因編輯-化療協(xié)同治療
    4.1 引言
    4.2 實驗材料及測試方法
        4.2.1 主要藥品及化學試劑
        4.2.2 主要生化試劑
        4.2.3 測試儀器及方法
    4.3 實驗方法
        4.3.1 四價鉑前藥cis,cis,trans-[Pt(Cl)₂(N₃)(OH)₂][Pt(Ⅳ)]的合成
        4.3.2 鏈消除聚鉑高分子(CSPt)的制備
        4.3.3 納米粒NP_CSPt的制備與表征
        4.3.4 NP_CSPt還原電勢測定
        4.3.5 NP_CSPt/pNC的制備及表征
        4.3.6 NP_CSPt和NP_CSPt/pNC的穩(wěn)定性比較
        4.3.7 NP_CSPt和NP_CSPt/pNC的還原敏感性
        4.3.8 NP_CSPt/pNC中Pt及pNC的響應性釋放
        4.3.9 細胞培養(yǎng)
        4.3.10 細胞內(nèi)吞
        4.3.11 細胞轉染
        4.3.12 細胞毒性評價
        4.3.13 細胞凋亡
        4.3.14 細胞劃痕實驗
        4.3.15 細胞增殖分析
        4.3.16 確立腫瘤模型
        4.3.17 抑瘤實驗
        4.3.18 血常規(guī)及生化指標分析
        4.3.19 組織學及免疫熒光分析
        4.3.20 TUNEL檢測
    4.4 結果與討論
        4.4.1 Pt(Ⅳ)的合成
        4.4.2 CSPt的合成
        4.4.3 NP_CSPt和NP_CSPt/pNC的制備及表征
        4.4.4 NP_CSPt和NP_CSPt/pNC的還原敏感性
        4.4.5 溶酶體逃逸和基因卸載
        4.4.6 NP_CSPt/pEZH2高效的基因編輯能力
        4.4.7 NP_CSPt/pEZH2的體外抗癌效果及機理
        4.4.8 動物水平抑瘤實驗
        4.4.9 血液生化指標及H&E染色
        4.4.10 機制研究
    4.5 本章結論
全文總結及展望
參考文獻
致謝
在讀期間發(fā)表的學術論文與取得的其他研究成果



本文編號：3817719

boshi