近年來稻米的香味品質(zhì)是水稻選育的一個重要性狀。OsBADH2基因是影響稻米香味的重要基因,選擇優(yōu)質(zhì)粳稻品種,針對該基因進行基于CRISPR/Cas9技術的基因編輯,有望創(chuàng)制出香味品質(zhì)優(yōu)異的粳稻材料。目前基于CRISPR/Cas9技術在水稻中進行基因編輯的研究均取得階段性進展,但在安全性及基因編輯效率等方面仍需要充分的優(yōu)化完善。本研究以建立快速、高效粳稻基因組編輯體系為最終目標。開展了圍繞OsBADH2基因的敲除編輯研究。在這項研究中,著重鑒選優(yōu)化了粳稻組培再生體系。驗證了高分辨率溶解曲線(HRM)技術在植物基因組編輯子代的檢測的可行性,分析了應用HRM技術篩選植物基因編輯材料的優(yōu)勢。在粳稻組培再生體系的鑒選過程中,本研究以降低時間成本為核心,分析了不同培養(yǎng)基組份配比對愈傷組織誘導、愈傷組織增殖、愈傷組織分化、再生苗生根等環(huán)節(jié)所需時間的多少;對植物常用的兩種基因編輯載體轉(zhuǎn)化方案(農(nóng)桿菌介導的轉(zhuǎn)化、基因槍介導的轉(zhuǎn)化)進行了比較,比較這兩種轉(zhuǎn)化方案所需的時間成本及單位時間的轉(zhuǎn)化概率。本研究首先通過分析OsBADH2基因外顯子序列的保守性,選擇了3個特異性靶點,分別構(gòu)建了U6啟動子驅(qū)動的包含不...

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【學位級別】：碩士

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摘要
Abstract
引言
第一章 文獻綜述
    1.1 作物基因組編輯技術
        1.1.1 基因組編輯技術在作物遺傳育種中的研究現(xiàn)狀
        1.1.2 CRISPR/Cas9介導的農(nóng)作物基因敲除
        1.1.3 安全、精準、快速、高效,是作物基因組編輯技術亟待攻克的研究目標
        1.1.4 農(nóng)作物基因組編輯后代材料的鑒選
    1.2 水稻遺傳轉(zhuǎn)化
        1.2.1 水稻組織培養(yǎng)
        1.2.2 遺傳轉(zhuǎn)化
    1.3 粳稻OsBADH2基因編輯
        1.3.1 香稻
        1.3.2 水稻香味物質(zhì) 2AP的代謝調(diào)控網(wǎng)絡
        1.3.3 香稻的選育
    1.4 粳稻OsBADH2基因編輯
第二章 基因的克隆及其表達分析分析
    2.1 實驗材料及試劑儀器
        2.1.1 粳稻材料
        2.1.2 試劑耗材
        2.1.3 儀器設備
    2.2 實驗方案及方法
        2.2.1 粳稻再生體系鑒選
        2.2.2 粳稻遺傳轉(zhuǎn)化體系鑒選
    2.3 實驗結(jié)果及分析
        2.3.1 粳稻成熟胚脫分化方案鑒選
        2.3.2 粳稻成熟胚脫分化激素配比優(yōu)化
        2.3.3 粳稻愈傷組織對潮霉素的敏感性評價
        2.3.4 粳稻的分化誘導
        2.3.5 再生粳稻的生根與煉苗
        2.3.6 粳稻遺傳再生體系整體優(yōu)化
    2.4 小結(jié)
第三章 OsBADH2基因編輯研究
    3.1 實驗材料及試劑儀器
        3.1.1 粳稻材料
        3.1.2 試劑耗材
        3.1.3 儀器設備
    3.2 實驗方案及方法
        3.2.1 OsBADH2基因編輯靶點的選擇
        3.2.2 OsBADH2基因編輯載體的構(gòu)建
        3.2.3 OsBADH2基因T0代編輯后代材料的鑒選
        3.2.4 OsBADH2基因T1代編輯材料的基因型分析及香味表型感官評價
    3.3 實驗結(jié)果及分析
        3.3.1 靶位點選擇結(jié)果及載體構(gòu)建結(jié)果
        3.3.2 粳稻基因編輯檢測體系
        3.3.3 粳稻OsBADH2基因編輯檢結(jié)果統(tǒng)計
        3.3.4 粳稻基因編輯材料的香味感官評價
    3.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
作者在攻讀碩士學位期間主要研究成果
致謝



本文編號：3811976