目的 :研究阻斷磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/絲氨酸-蘇氨酸激酶(seride-threonine protein kinase,又稱Akt)信號通路對逆轉(zhuǎn)耐羥基喜樹堿(hydroxycamptothecin,HCPT)人結(jié)腸癌SW1116/HCPT細胞多藥耐藥性的影響。方法:采用蛋白質(zhì)印跡法檢測親本SW1116細胞和耐HCPT細胞株SW1116/HCPT中Akt及磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)蛋白的表達水平。應(yīng)用針對PI3K/Akt信號通路的小分子抑制劑LY294002或siR NA干擾的方法分別抑制或沉默Akt蛋白的表達;MTT法檢測抑制或沉默Akt蛋白表達后,HCPT對SW1116/HCPT細胞生存率的影響;實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測對耐藥轉(zhuǎn)運體三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體G(2ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)mR NA及蛋白表達的影響;羅丹明123(rhodamine123,Rh123)法檢測對SW1116/HCPT細胞藥物外排功能的影響。結(jié)...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞與試劑
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 蛋白質(zhì)印跡法檢測親本SW1116和耐藥SW1116/HCPT細胞中Akt及p-Akt的表達水平
        1.2.3 瞬時轉(zhuǎn)染si RNA及有效si RNA的篩選
        1.2.4 抑制或沉默Akt基因表達對耐藥SW1116/HCPT細胞中PI3K/Akt信號通路活性的影響
        1.2.5 采用MTT法檢測細胞的存活率
        1.2.6 抑制或沉默Akt基因表達對耐藥相關(guān)基因ABCG2 m RNA表達的影響
        1.2.7 抑制或沉默Akt基因表達對耐藥相關(guān)基因ABCG2蛋白表達水平的影響
        1.2.8 Rh123藥物外排實驗
        1.2.9 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 親本細胞SW1116和耐藥細胞SW1116/HCPT中Akt的表達和活化
    2.2 有效si RNA的篩選
    2.3 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達對耐藥SW1116/HCPT細胞中PI3K/Akt信號通路活性的影響
    2.4 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達后SW1116/HCPT細胞對HCPT藥物敏感性的改變
    2.5 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達對SW1116/HCPT細胞中ABCG2表達的影響
    2.6 LY294002抑制及Akt-si RNA沉默Akt基因表達對耐藥細胞ABCG2轉(zhuǎn)運功能的影響
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