植物所特有的HD2家族蛋白是一類重要的組蛋白去乙酰酶(HDAC),在調(diào)節(jié)真核生物的組蛋白乙�；缴掀鹬匾饔�,對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育和逆境適應(yīng)均具有重要的影響。水稻中存在3個(gè)HD2家族蛋白,其中OsHDT701和OsHDT702的生物學(xué)功能已被報(bào)道,OsHDT703的生物學(xué)功能目前尚未見報(bào)道。本研究在分析了OsHDT703基因及其所編碼蛋白質(zhì)特點(diǎn)的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步鑒定了該基因可能存在的可變剪接體,揭示了正常和逆境下OsHDT703在水稻不同組織部位中的表達(dá)模式,初步確定了OsHDT703蛋白在細(xì)胞中的表達(dá)部位及其組蛋白去乙酰酶活性,創(chuàng)建了OsHDT703的CRISPR敲除表達(dá)、過量表達(dá)及其與FLAG融合表達(dá)的轉(zhuǎn)基因水稻材料,為進(jìn)一步研究OsHDT703基因的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:1.OsHDT703及其編碼蛋白的生物信息學(xué)分析OsHDT703位于水稻的第1號(hào)染色體上,啟動(dòng)子序列中含有多種與激素和逆境響應(yīng)相關(guān)的作用元件,如干旱誘導(dǎo)的MYB結(jié)合位點(diǎn)MBS、ABA響應(yīng)元件、赤霉素響應(yīng)元件等。該基因存在5種可變剪接體,這些剪接體對(duì)應(yīng)的編碼蛋白均具有HD2家族蛋白保守的NPL結(jié)構(gòu)域;系...

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 表觀遺傳學(xué)
    1.2 組蛋白修飾作用
    1.3 組蛋白乙�；�
        1.3.1 組蛋白乙酰轉(zhuǎn)移酶(HAT)
        1.3.2 組蛋白去乙酰化酶(HDAC)
    1.4 HD2 蛋白的研究進(jìn)展
    1.5 本研究的目的和意義
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 水稻材料
        2.1.2 載體和實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 OsHDT703 基因生物信息學(xué)分析
        2.2.2 OsHDT703 基因的啟動(dòng)子序列分析
        2.2.3 OsHDT703 蛋白進(jìn)化分析
        2.2.4 載體構(gòu)建
        2.2.5 水稻組織培養(yǎng)以及農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.6 核酸相關(guān)實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因陽性植株的鑒定
        2.2.8 T₂ 代過表達(dá)純合植株篩選
        2.2.9 提取水稻葉片總蛋白
        2.2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)
        2.2.11 OsHDT703 亞細(xì)胞定位載體的構(gòu)建
        2.2.12 擬南芥原生質(zhì)體的制備及轉(zhuǎn)化
第三章 結(jié)果分析
    3.1 OsHDT703 基因的生物信息學(xué)分析
        3.1.1 水稻OsHDT703 基因的可變剪接體分析
        3.1.2 水稻OsHDT703 基因的啟動(dòng)子序列分析
        3.1.3 水稻OsHDT703 蛋白的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        3.1.4 水稻OsHDT703 蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系
    3.2 水稻OsHDT703 基因的可變剪接體鑒定
        3.2.1 可變剪接體的鑒定引物及其在可變剪接體上的位置
        3.2.2 水稻OsHDT703 基因可變剪接體的RT-PCR擴(kuò)增
        3.2.3 OsHDT703 可變剪接體的RT-PCR產(chǎn)物克隆測(cè)序結(jié)果
    3.3 水稻OsHDT703 蛋白的亞細(xì)胞定位
    3.4 正常和逆境下水稻OsHDT703 基因的組織表達(dá)特性分析
        3.4.1 正常條件下OsHDT703 在水稻中的組織表達(dá)特性
        3.4.2 逆境下OsHDT703 在水稻不同組織中的差異表達(dá)
    3.5 水稻OsHDT703 的轉(zhuǎn)基因材料創(chuàng)建
        3.5.1 水稻OsHDT703的CRISPR/Cas9 敲除載體構(gòu)建
        3.5.2 水稻OsHDT703 的過量表達(dá)載體構(gòu)建
        3.5.3 OsHDT703-FLAG融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.5.4 成功獲得了OsHDT703 的轉(zhuǎn)基因T₀ 代植株
        3.5.5 檢測(cè)獲得了OsHDT703 的轉(zhuǎn)基因T₀ 代陽性植株
        3.5.6 水稻OsHDT703 敲除植株T₀ 代突變類型鑒定
        3.5.7 鑒定獲得了OsHDT703 的過量表達(dá)轉(zhuǎn)基因T₂ 代純合植株
    3.6 H4 組蛋白的乙�；綑z測(cè)
第四章 討論與展望
    4.1 水稻OsHDT703 基因的表達(dá)模式
    4.2 水稻OsHDT703 基因的啟動(dòng)子分析
    4.3 水稻OsHDT703 基因可能具有組蛋白去乙�；傅淖饔�
    4.4 OsHDT703 基因的研究展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄A
攻讀學(xué)位期間的研究成果



本文編號(hào)：3774587