絲瓜(Luffa cylindrical)以其柔嫩多汁的果實(shí)和清熱解暑的功效深受人們的喜愛(ài),但在烹飪時(shí)易發(fā)生褐變,大大降低了感官品質(zhì)、食用價(jià)值、商品價(jià)值,而且還阻礙產(chǎn)品流通,縮短貨架期,甚至嚴(yán)重影響人們的視覺(jué)感受和食欲,讓消費(fèi)者無(wú)法接受,已成為制約果蔬貯運(yùn)加工業(yè)發(fā)展的主要障礙之一。多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)是引起絲瓜褐變的關(guān)鍵酶,能夠在02的參與下對(duì)酚類底物催化氧化成醌,進(jìn)而導(dǎo)致褐變,從分子生物學(xué)角度了解褐變機(jī)理并控制褐變的發(fā)生已成為果蔬采后研究的熱點(diǎn)。本研究在轉(zhuǎn)錄組測(cè)序基礎(chǔ)上,以普通絲瓜為材料,通過(guò)RT-PCR方法獲得絲瓜PPO基因家族成員,利用qPCR(實(shí)時(shí)熒光定量擴(kuò)增檢測(cè))方法測(cè)定絲瓜組織器官、品種、貯藏期、以及鮮切放置時(shí)間下PP0基因的表達(dá)變化,分析PPO基因表達(dá)、酶活性與褐變之間的關(guān)系,初步探討PPO基因功能及其在絲瓜褐變過(guò)程中的作用,同時(shí)構(gòu)建重組載體進(jìn)行原核表達(dá),為絲瓜PPO蛋白的進(jìn)一步分離純化和活性測(cè)定提供物質(zhì)基礎(chǔ)和理論支持,也為進(jìn)一步探討其功能提供可能。主要結(jié)果如下:(1)利用改良消光值法測(cè)定了 2個(gè)有棱絲瓜和6個(gè)普通絲瓜品種的褐變度,篩...

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1 酶促褐變與多酚氧化酶
    2 多酚氧化酶的酶學(xué)特性
    3 多酚氧化酶的蛋白結(jié)構(gòu)研究
    4 PPO基因的分子生物學(xué)研究
        4.1 PPO基因的克隆
        4.2 PPO基因特性
            4.2.1 PPO基因具有多基因家族性和高度保守性
            4.2.2 PPO基因內(nèi)含子研究
        4.3 PPO基因表達(dá)研究
        4.4 PPO基因的原核表達(dá)
    5 多酚氧化酶的功能研究
    6 研究目的、意義與主要內(nèi)容
        6.1 研究目的與意義
        6.2 研究技術(shù)路線
第二章 絲瓜褐變過(guò)程中PPO酶活性的變化分析
    1 材料與方法
        1.1材料與試劑
        1.2 試驗(yàn)方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 絲瓜褐變度結(jié)果分析
        2.2 4℃冷藏處理和25℃常溫貯存下絲瓜總酚含量的變化
        2.3 4℃冷藏過(guò)程中絲瓜PPO酶活性變化
        2.4 25℃常溫處理下絲瓜PPO酶活性變化
    3 結(jié)論與討論
第三章 絲瓜PPO家族基因的克隆
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 絲瓜樣品總RNA提取質(zhì)量
        2.2 絲瓜PPO基因家族的克隆
        2.3 絲瓜PPO cDNA序列比較
    3 結(jié)論與討論
第四章 絲瓜PPO基因家族的生物信息學(xué)分析
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 LcPPO基因家族蛋白一級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        2.2 LcPPO基因家族的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)與分析
        2.3 LcPPO基因家族保守區(qū)域序列分析
        2.4 LcPPO基因家族的亞細(xì)胞定位與轉(zhuǎn)移肽的預(yù)測(cè)分析
        2.5 LcPPO基因家族的跨膜結(jié)構(gòu)與信號(hào)肽的預(yù)測(cè)分析
        2.6 LcPPO基因蛋白磷酸位點(diǎn)預(yù)測(cè)的預(yù)測(cè)分析
        2.7 LcPPO基因家族同源性分析及進(jìn)化樹(shù)圖譜的構(gòu)建
    3 結(jié)論與討論
第五章 絲瓜褐變中PPO家族基因的表達(dá)及相關(guān)性分析
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
            1.1.1 試驗(yàn)材料
            1.1.2 試驗(yàn)儀器
            1.1.3 試驗(yàn)試劑
        1.2 試驗(yàn)方法
            1.2.1 絲瓜樣品的處理
            1.2.2 總RNA的提取與cDNA模板的合成
            1.2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)
            1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PGR
            1.2.5 數(shù)據(jù)處理與分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 絲瓜不同組織中LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表達(dá)分析
        2.2 絲瓜不同品種LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表達(dá)分析
        2.3 4℃冷藏過(guò)程下絲瓜果肉LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表達(dá)分析
        2.4 25℃常溫處理下絲瓜LcPPO1、LcPPO2、LcPPO3基因的表達(dá)分析
        2.5 LcPPO熒光定量表達(dá)量、酶活性以及總酚含量變化的相關(guān)性分析
    3 結(jié)論與討論
第六章 絲瓜LcPPO2的原核表達(dá)
    1 材料與方法
        1.1 材料與試劑
        1.2 方法
    2 結(jié)果與分析
        2.1 克隆載體的構(gòu)建
        2.2 表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
        2.3 重組質(zhì)粒的鑒定
        2.4 融合蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
    3 結(jié)論與討論
全文總結(jié)與展望
    1.全文總結(jié)
    2.展望
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士期間發(fā)表論文、參加學(xué)術(shù)會(huì)議與獲獎(jiǎng)情況
致謝



本文編號(hào)：3770720