目的篩選赤芝三萜合成途徑中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游調(diào)控轉(zhuǎn)錄因子。方法首先克隆了FPS基因啟動子,并連接至pAbAi質(zhì)粒構(gòu)建誘餌載體pAbAi-FPS。將pAbAi-FPS轉(zhuǎn)化Y1H酵母感受態(tài)細胞構(gòu)建誘餌菌。采用SMART技術構(gòu)建赤芝酵母單雜交cDNA文庫,再將純化的雙鏈cDNA、pGADT7-Rec共轉(zhuǎn)化誘餌菌株,篩選FPS上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。結(jié)果構(gòu)建了含pAbAi-FPS的誘餌載體并篩選出誘餌菌株,構(gòu)建了cDNA文庫并轉(zhuǎn)化誘餌菌株,篩選出陽性克隆37個,得到作用FPS基因上游的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子18個,包括轉(zhuǎn)錄因子3個、核糖體蛋白5個及其他家族蛋白10個。結(jié)論篩選出轉(zhuǎn)錄因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6為調(diào)控FPS表達的候選基因,為深入研究FPS基因的表達調(diào)控機制奠定了研究基礎。

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【文章目錄】：
1 材料
2 方法
    2.1 赤芝FPS基因啟動子的克隆及序列分析
    2.2 誘餌菌株p Ab Ai-FPS的構(gòu)建
    2.3 c DNA融合表達文庫的構(gòu)建及篩選
    2.4 陽性克隆的鑒定及測序分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 FPS基因啟動子的序列分析
    3.2 誘餌載體的鑒定
    3.3 誘餌菌株的篩選
    3.4 c DNA文庫的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化誘餌菌株
    3.5 c DNA融合表達文庫鑒定及序列分析
4 討論



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