糖為植物提供重要的碳源和能源。植物生長發(fā)育過程中糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白對調(diào)節(jié)糖類運(yùn)轉(zhuǎn)與分布起著至關(guān)重要的作用。SWEETs基因家族作為近年來發(fā)現(xiàn)的糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白可以參與對多種單糖和多糖的轉(zhuǎn)運(yùn),但目前對SWEETs家族成員的生理功能及其作用機(jī)制仍有許多問題需要解決。如SWEETs家族成員的亞細(xì)胞定位及其時(shí)空表達(dá)特性等。前期研究表明Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14基因在番茄果實(shí)成熟的綠熟期與紅熟期有不同的表達(dá)模式,推測SWEETs基因可能參與番茄果實(shí)成熟過程中糖的轉(zhuǎn)運(yùn)與分配。驅(qū)動(dòng)基因表達(dá)的啟動(dòng)子是調(diào)控基因表達(dá)的重要元件,在基因表達(dá)的功能調(diào)控中顯得尤其重要。本研究對Sl SWEET7a,-11b,-12c和-14的4個(gè)基因及啟動(dòng)子進(jìn)行組織分布與亞細(xì)胞定位分析,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)克隆基因全長以及啟動(dòng)子,構(gòu)建SlSWEETn::GUS與SlSWEETn::GFP載體,通過番茄果實(shí)的瞬時(shí)表達(dá)與擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行GUS活性的分析來說明啟動(dòng)子的表達(dá)模式,通過洋蔥與煙草葉片的瞬時(shí)表達(dá),進(jìn)行4個(gè)SWEETs基因的亞細(xì)胞定位。獲得的主要研究結(jié)果如下:1、利用Gateway技術(shù)構(gòu)建了4個(gè)SWEETs基因的S...

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 SWEETs基因家族研究進(jìn)展
        1.1.1 SWEETs蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 植物SWEET蛋白的結(jié)構(gòu)特征
        1.1.3 植物SWEET蛋白的功能
    1.2 高等植物啟動(dòng)子功能的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.2 高等植物啟動(dòng)子類型
        1.2.3 高等植物啟動(dòng)子研究方法
    1.3 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料與培養(yǎng)
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
        2.1.5 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 引物設(shè)計(jì)
        2.2.2 基因組DNA的提取
        2.2.3 PCR擴(kuò)增目的片段
        2.2.4 DNA片段的回收
        2.2.5 啟動(dòng)子的GUS表達(dá)載體構(gòu)建
        2.2.6 GFP載體構(gòu)建
        2.2.7 GUS組織化學(xué)染色分析
        2.2.8 洋蔥表皮細(xì)胞的瞬時(shí)表達(dá)
        2.2.9 煙草葉片的瞬時(shí)表達(dá)
3 結(jié)果與分析
    3.1 番茄果實(shí)4個(gè)SWEETs基因啟動(dòng)子的序列分析
    3.2 啟動(dòng)子GUS表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.1 番茄DNA提取與檢測
        3.2.2 啟動(dòng)子片段的克隆
        3.2.3 啟動(dòng)子GUS表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.3 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因的GFP融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.1 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14基因cDNA全長的獲得
        3.3.2 GFP載體構(gòu)建
    3.4 番茄果實(shí)的瞬時(shí)表達(dá)
    3.5 啟動(dòng)子GUS表達(dá)載體在擬南芥中的遺傳轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)基因材料的鑒定
        3.5.1 擬南芥抗性植株的篩選
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因擬南芥GUS組織化學(xué)染色分析
    3.6 SlSWEET7a,-11b,-12c及-14在洋蔥表皮細(xì)胞的亞細(xì)胞定位分析
    3.7 SlSWEET7a,-11b,-12c,-14在煙草葉片的亞細(xì)胞定位分析
4 討論
    4.1 番茄4個(gè)SWEETs基因的組織分布與亞細(xì)胞定位特征
    4.2 SlSWEET7a和SlSWEET14啟動(dòng)子截短對基因表達(dá)組織分布的影響
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號：3767324