銀杏葉片中含有豐富的黃酮類化合物,但隨著樹齡的增加,葉片中黃酮類化合物含量逐漸降低,生產(chǎn)實(shí)踐中一般采用截干措施來(lái)提高銀杏葉黃酮類化合物含量。R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子作為MYB基因家族中最大的一類家族,同樣參與銀杏類黃酮代謝的調(diào)控。因此,研究截干對(duì)銀杏葉類黃酮代謝途徑的影響,探索截干處理下調(diào)控類黃酮代謝相關(guān)R2R3-MYB轉(zhuǎn)錄因子差異表達(dá)有重要意義。本研究通過(guò)對(duì)銀杏嫁接苗(嫁接成功后生長(zhǎng)一年)進(jìn)行截干處理,研究了生長(zhǎng)周期內(nèi)銀杏葉片總黃酮苷、槲皮素、山柰酚、異鼠李素含量的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律,以及黃酮類化合物總還原力、自由基清除率的變化規(guī)律。為了更準(zhǔn)確測(cè)定基因表達(dá)量,在篩選適合本研究最佳內(nèi)參基因的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究了截干處理下銀杏類黃酮代謝途徑中的9個(gè)關(guān)鍵酶結(jié)構(gòu)基因(GbPAL、GbC4H、Gb4CL、GbCHS、GbF3H、GbFLS、GbDFR、GbANS、GbUFGT)表達(dá)水平的變化�；阢y杏基因組信息開展了R2R3-MYB基因家族的鑒定與分析,通過(guò)轉(zhuǎn)錄組學(xué)測(cè)序技術(shù),篩選了截干后與類黃酮相關(guān)的GbR2R3-MYB基因。獲得了2個(gè)潛在的GbR2R3-MYB基因(Gb＿22884和Gb＿3985...

【文章頁(yè)數(shù)】：77 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
第一章 前言
    1.1 銀杏簡(jiǎn)介
    1.2 植物類黃酮代謝調(diào)控
        1.2.1 植物類黃酮代謝調(diào)控途徑中的結(jié)構(gòu)基因
        1.2.2 植物類黃酮代謝調(diào)控途徑中的調(diào)控基因
        1.2.3 植物中R2R3-MYB基因家族研究現(xiàn)狀
    1.3 銀杏中類黃酮代謝調(diào)控
        1.3.1 銀杏中參與類黃酮代謝調(diào)控途徑的相關(guān)基因
        1.3.2 影響銀杏葉黃酮類化合物積累因子
    1.4 截干對(duì)植物生長(zhǎng)及基因表達(dá)的影響
    1.5 本研究的目的意義及技術(shù)路線
        1.5.1 目的及意義
        1.5.2 技術(shù)路線
第二章 截干對(duì)銀杏黃酮類化合物及其抗氧化性的影響
    2.1 材料與方法
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試驗(yàn)試劑
        2.1.3 試驗(yàn)儀器
        2.1.4 試驗(yàn)方法
            2.1.4.1 銀杏葉總黃酮苷含量的測(cè)定
            2.1.4.2 銀杏葉總還原力的測(cè)定
            2.1.4.3 銀杏葉自由基清除率的測(cè)定
    2.2 結(jié)果與分析
        2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定
        2.2.2 截干對(duì)銀杏葉槲皮素含量的影響
        2.2.3 截干對(duì)銀杏葉山柰酚含量的影響
        2.2.4 截干對(duì)銀杏葉異鼠李素含量的影響
        2.2.5 截干對(duì)銀杏葉總黃酮苷含量的影響
        2.2.6 截干對(duì)銀杏葉黃酮類提取物抗氧化能力的影響
    2.3 討論
第三章 截干對(duì)銀杏類黃酮代謝相關(guān)酶基因表達(dá)的影響
    3.1 試驗(yàn)材料與儀器
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 試驗(yàn)儀器與試劑
    3.2 試驗(yàn)方法
        3.2.1 銀杏葉總RNA的提取
        3.2.2 銀杏葉第一鏈cDNA的合成
        3.2.3 目的基因引物設(shè)計(jì)
        3.2.4 內(nèi)參基因的篩選
        3.2.5 相關(guān)酶基因結(jié)構(gòu)分析及染色體定位分析
        3.2.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 銀杏RNA提取與質(zhì)量檢測(cè)
        3.3.2 內(nèi)參基因及關(guān)鍵酶基因引物特異性分析
        3.3.3 候選內(nèi)參基因表達(dá)譜分析
        3.3.4 候選基因的穩(wěn)定性表達(dá)分析
            3.3.4.1 ge Norm軟件分析
            3.3.4.2 Norm Finder軟件分析
            3.3.4.3 Best Keeper軟件分析
        3.3.5 候選內(nèi)參基因的可靠性評(píng)價(jià)
        3.3.6 相關(guān)酶基因結(jié)構(gòu)分析及染色體定位分析
        3.3.7 截干對(duì)銀杏相關(guān)結(jié)構(gòu)基因表達(dá)水平分析
    3.4 討論
第四章 銀杏類黃酮相關(guān)R2R3-MYB基因篩選及功能分析
    4.1 植物材料
    4.2 試驗(yàn)試劑
    4.3 試驗(yàn)儀器
    4.4 試驗(yàn)方法
        4.4.1 銀杏轉(zhuǎn)錄組測(cè)序分析
        4.4.2 銀杏R2R3-MYB基因家族的分析
            4.4.2.1 銀杏R2R3-MYB基因家族的鑒定
            4.4.2.2 銀杏R2R3-MYB基因家族染色體定位分析
            4.4.2.3 銀杏R2R3-MYB基因家族的序列分析
            4.4.2.4 銀杏R2R3-MYB基因家族時(shí)空表達(dá)模式分析
        4.4.3 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因的克隆及轉(zhuǎn)化
            4.4.3.1 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因引物設(shè)計(jì)及克隆
            4.4.3.2 目的片段與驗(yàn)證載體連接及連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化驗(yàn)證
            4.4.3.3 過(guò)表達(dá)載體的連接與驗(yàn)證
            4.4.3.4 擬南芥的種植及種子的收集
            4.4.3.5 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥轉(zhuǎn)化
            4.4.3.6 轉(zhuǎn)基因植株的篩選及檢測(cè)
    4.5 結(jié)果與分析
        4.5.1 銀杏Gb R2R3-MYB基因家族分析
            4.5.1.1 銀杏Gb R2R3-MYB基因家族染色體定位分析
            4.5.1.2 銀杏Gb R2R3-MYB基因家族保守基序預(yù)測(cè)
            4.5.1.3 銀杏Gb R2R3-MYB基因家族結(jié)構(gòu)分析
            4.5.1.4 銀杏Gb R2R3-MYB基因家族時(shí)空表達(dá)模式分析
        4.5.2 截干處理對(duì)銀杏葉片相關(guān)基因表達(dá)的影響
            4.5.2.1 銀杏葉RNA-Seq與序列比對(duì)
            4.5.2.2 截干對(duì)銀杏葉基因差異表達(dá)分析
            4.5.2.3 截干對(duì)銀杏差異表達(dá)基因的功能富集分析
            4.5.2.4 截干對(duì)銀杏類黃酮相關(guān)結(jié)構(gòu)基因差異表達(dá)分析
            4.5.2.5 截干對(duì)銀杏Gb R2R3-MYB基因差異表達(dá)分析
        4.5.3 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因的篩選及遺傳轉(zhuǎn)化
            4.5.3.1 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因的篩選及差異表達(dá)分析
            4.5.3.2 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因的克隆轉(zhuǎn)化分析
            4.5.3.3 銀杏Gb₂2884和Gb₃9852基因的遺傳轉(zhuǎn)化
            4.5.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的篩選及檢測(cè)
    4.6 討論
第五章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3754894