膠質瘤占顱腦腫瘤的40%⁵0%,是最常見的顱內惡性腫瘤。由于膠質瘤生長部位特殊,且具有快速生長、腫瘤內部高度異質性等特征,其治療手段有限、預后生存較差、死亡率較高,目前仍是神經外科的一大難題。環(huán)指蛋白213(Ring finger protein,RNF213)是一個分子量為519 kDa的鋅指蛋白,具有AAA+ATPase和E3 ligase結構域。研究發(fā)現RNF213基因與煙霧病發(fā)病相關,并且有促進血管生成和蛋白泛素化等功能。但是RNF213在腫瘤中作用報道較少。僅有部分研究發(fā)現RNF213基因在肝癌、胰腺癌、胃癌等癌癥中發(fā)生基因突變。并且有研究提示RNF213與膠質瘤發(fā)病可能有關系,但是其具體功能及分子機制不明確。在本研究中,我們檢測膠質瘤臨床標本發(fā)現RNF213在膠質瘤組織中表達量較低,而在癌旁組織和正常腦組織中RNF213的表達相對較高。生存期分析表明RNF213表達越低,膠質瘤患者5年生存率越低。免疫組化技術檢測進一步證實RNF213在膠質瘤組織中表達呈陰性或者弱陽性,而在癌旁組織中表達呈強陽性。該結果提示RNF213基因在膠質瘤發(fā)病及進展中可能有重要...

【文章頁數】：100 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞
第1章 引言
    1.1 膠質瘤臨床研究概述
        1.1.1 膠質瘤分類
        1.1.2 膠質瘤治療及預后
        1.1.3 膠質瘤發(fā)病原因
        1.1.4 膠質瘤發(fā)病信號機制
    1.2 環(huán)指蛋白
        1.2.1 環(huán)指結構域
        1.2.2 環(huán)指結構域功能
    1.3 環(huán)指蛋白213
        1.3.1 RNF213結構
        1.3.2 RNF213與腦部疾病
        1.3.3 RNF213與腫瘤形成的關系
        1.3.4 RNF213與腦部腫瘤的關系
    1.4 RNF213相關信號調控
    1.5 MAPK信號通路與膠質瘤發(fā)生
        1.5.1 MAPK信號概述
        1.5.2 JNKs信號與膠質瘤關系
    1.6 結語
第2章 RNF213基因在膠質母細胞瘤發(fā)病中的功能研究
    2.1 前言
    2.2 實驗材料
        2.2.1 細胞株及質粒
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 主要溶液配制
    2.3 實驗方法
        2.3.1 細胞培養(yǎng)相關操作
        2.3.2 總RNA提取
        2.3.3 cDNA第一鏈合成
        2.3.4 熒光定量PCR檢測
        2.3.5 RNF213基因合成
        2.3.6 質粒DNA提取及定量
        2.3.7 慢病毒表達質粒pCDH-RNF213構建
        2.3.8 過表達RNF213基因的慢病毒顆粒制備
        2.3.9 慢病毒顆粒感染細胞
        2.3.10 慢病毒顆粒滴度測定
        2.3.11 穩(wěn)轉細胞株構建
        2.3.12 RNF213干擾相關操作
        2.3.13 蛋白質提取及濃度測定
        2.3.14 CCK8法檢測細胞增殖
        2.3.15 Colony formation實驗檢測細胞克隆形成
        2.3.16 Wound scratch healing實驗檢測細胞遷移
        2.3.17 Transwell法檢測細胞侵襲
        2.3.18 FITC法檢測細胞凋亡
        2.3.19 PI染色法檢測細胞周期
        2.3.20 免疫組化實驗檢測目的基因臨床相關性
        2.3.21 組織芯片圖像采集及分析評價
        2.3.22 Western blotting分析
        2.3.23 體內成瘤實驗
        2.3.24 基因表達譜芯片檢測及分析
        2.3.25 統(tǒng)計學分析
    2.4 實驗結果
        2.4.1 RNF213基因在GBM臨床樣本中表達檢測
        2.4.2 RNF213基因在膠質瘤細胞系中呈中豐度表達
        2.4.3 RAF213基因敲減驗證
        2.4.4 RNF213敲減促進膠質瘤細胞增殖
        2.4.5 RNF213對膠質瘤細胞克隆形成影響
        2.4.6 RNF213對細胞侵襲行為影響
        2.4.7 RNF213敲減促進膠質瘤細胞遷移
        2.4.8 RAF213敲減抑制膠質瘤細胞凋亡
        2.4.9 RNF213基因對細胞周期分布的影響
        2.4.10 敲減RNF213基因促進膠質瘤體內生長
        2.4.11 過表達RNF213抑制細胞增殖
        2.4.12 過表達RNF213抑制細胞侵襲
        2.4.13 過表達RNF213促進細胞凋亡
    2.5 討論
    2.6 實驗結論
第3章 RNF213基因在膠質母細胞瘤發(fā)病中的分子機制研究
    3.1 前言
    3.2 實驗材料
        3.2.1 細胞株及質粒
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)相關操作
        3.3.2 總RNA提取
        3.3.3 cDNA第一鏈合成
        3.3.4 熒光定量PCR檢測
        3.3.5 質粒DNA提取及定量
        3.3.6 過表達RNF213基因的慢病毒顆粒制備
        3.3.7 慢病毒顆粒感染細胞
        3.3.8 慢病毒顆粒滴度測定
        3.3.9 蛋白質提取及濃度測定
        3.3.10 免疫共沉淀實驗
        3.3.11 CCK8法檢測細胞增殖
        3.3.12 Wound scratch healing實驗檢測細胞遷移
        3.3.13 Transwell法檢測細胞侵襲
        3.3.14 Western blotting分析
        3.3.15 基因表達譜芯片檢測及分析
        3.3.16 統(tǒng)計學分析
    3.4 實驗結果
        3.4.1 基因表達譜芯片檢測RNF213基因下游應答基因
        3.4.2 RNF213調控MAPK/JNK信號通路
        3.4.3 免疫共沉淀實驗檢測與RNF213互作蛋白
        3.4.4 RNF213對MAPK/JNK信號調控依賴SOCS1
        3.4.5 SOCS1參與調控RNF213對細胞增殖效應
        3.4.6 SOCS1參與調控RNF213對細胞侵襲影響
    3.5 討論
    3.6 實驗結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
文獻綜述
    參考文獻



本文編號：3754857