膠質(zhì)瘤占顱腦腫瘤的40%⁵0%,是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤。由于膠質(zhì)瘤生長(zhǎng)部位特殊,且具有快速生長(zhǎng)、腫瘤內(nèi)部高度異質(zhì)性等特征,其治療手段有限、預(yù)后生存較差、死亡率較高,目前仍是神經(jīng)外科的一大難題。環(huán)指蛋白213(Ring finger protein,RNF213)是一個(gè)分子量為519 kDa的鋅指蛋白,具有AAA+ATPase和E3 ligase結(jié)構(gòu)域。研究發(fā)現(xiàn)RNF213基因與煙霧病發(fā)病相關(guān),并且有促進(jìn)血管生成和蛋白泛素化等功能。但是RNF213在腫瘤中作用報(bào)道較少。僅有部分研究發(fā)現(xiàn)RNF213基因在肝癌、胰腺癌、胃癌等癌癥中發(fā)生基因突變。并且有研究提示RNF213與膠質(zhì)瘤發(fā)病可能有關(guān)系,但是其具體功能及分子機(jī)制不明確。在本研究中,我們檢測(cè)膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本發(fā)現(xiàn)RNF213在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)量較低,而在癌旁組織和正常腦組織中RNF213的表達(dá)相對(duì)較高。生存期分析表明RNF213表達(dá)越低,膠質(zhì)瘤患者5年生存率越低。免疫組化技術(shù)檢測(cè)進(jìn)一步證實(shí)RNF213在膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)呈陰性或者弱陽(yáng)性,而在癌旁組織中表達(dá)呈強(qiáng)陽(yáng)性。該結(jié)果提示RNF213基因在膠質(zhì)瘤發(fā)病及進(jìn)展中可能有重要...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞
第1章 引言
    1.1 膠質(zhì)瘤臨床研究概述
        1.1.1 膠質(zhì)瘤分類
        1.1.2 膠質(zhì)瘤治療及預(yù)后
        1.1.3 膠質(zhì)瘤發(fā)病原因
        1.1.4 膠質(zhì)瘤發(fā)病信號(hào)機(jī)制
    1.2 環(huán)指蛋白
        1.2.1 環(huán)指結(jié)構(gòu)域
        1.2.2 環(huán)指結(jié)構(gòu)域功能
    1.3 環(huán)指蛋白213
        1.3.1 RNF213結(jié)構(gòu)
        1.3.2 RNF213與腦部疾病
        1.3.3 RNF213與腫瘤形成的關(guān)系
        1.3.4 RNF213與腦部腫瘤的關(guān)系
    1.4 RNF213相關(guān)信號(hào)調(diào)控
    1.5 MAPK信號(hào)通路與膠質(zhì)瘤發(fā)生
        1.5.1 MAPK信號(hào)概述
        1.5.2 JNKs信號(hào)與膠質(zhì)瘤關(guān)系
    1.6 結(jié)語(yǔ)
第2章 RNF213基因在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病中的功能研究
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        2.2.2 主要儀器
        2.2.3 主要試劑
        2.2.4 主要溶液配制
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)操作
        2.3.2 總RNA提取
        2.3.3 cDNA第一鏈合成
        2.3.4 熒光定量PCR檢測(cè)
        2.3.5 RNF213基因合成
        2.3.6 質(zhì)粒DNA提取及定量
        2.3.7 慢病毒表達(dá)質(zhì)粒pCDH-RNF213構(gòu)建
        2.3.8 過表達(dá)RNF213基因的慢病毒顆粒制備
        2.3.9 慢病毒顆粒感染細(xì)胞
        2.3.10 慢病毒顆粒滴度測(cè)定
        2.3.11 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建
        2.3.12 RNF213干擾相關(guān)操作
        2.3.13 蛋白質(zhì)提取及濃度測(cè)定
        2.3.14 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        2.3.15 Colony formation實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞克隆形成
        2.3.16 Wound scratch healing實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移
        2.3.17 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲
        2.3.18 FITC法檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.3.19 PI染色法檢測(cè)細(xì)胞周期
        2.3.20 免疫組化實(shí)驗(yàn)檢測(cè)目的基因臨床相關(guān)性
        2.3.21 組織芯片圖像采集及分析評(píng)價(jià)
        2.3.22 Western blotting分析
        2.3.23 體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)
        2.3.24 基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)及分析
        2.3.25 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 RNF213基因在GBM臨床樣本中表達(dá)檢測(cè)
        2.4.2 RNF213基因在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中呈中豐度表達(dá)
        2.4.3 RAF213基因敲減驗(yàn)證
        2.4.4 RNF213敲減促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖
        2.4.5 RNF213對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞克隆形成影響
        2.4.6 RNF213對(duì)細(xì)胞侵襲行為影響
        2.4.7 RNF213敲減促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移
        2.4.8 RAF213敲減抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡
        2.4.9 RNF213基因?qū)?xì)胞周期分布的影響
        2.4.10 敲減RNF213基因促進(jìn)膠質(zhì)瘤體內(nèi)生長(zhǎng)
        2.4.11 過表達(dá)RNF213抑制細(xì)胞增殖
        2.4.12 過表達(dá)RNF213抑制細(xì)胞侵襲
        2.4.13 過表達(dá)RNF213促進(jìn)細(xì)胞凋亡
    2.5 討論
    2.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
第3章 RNF213基因在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤發(fā)病中的分子機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 細(xì)胞株及質(zhì)粒
        3.2.2 主要儀器
        3.2.3 主要試劑
        3.2.4 主要溶液配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)操作
        3.3.2 總RNA提取
        3.3.3 cDNA第一鏈合成
        3.3.4 熒光定量PCR檢測(cè)
        3.3.5 質(zhì)粒DNA提取及定量
        3.3.6 過表達(dá)RNF213基因的慢病毒顆粒制備
        3.3.7 慢病毒顆粒感染細(xì)胞
        3.3.8 慢病毒顆粒滴度測(cè)定
        3.3.9 蛋白質(zhì)提取及濃度測(cè)定
        3.3.10 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)
        3.3.11 CCK8法檢測(cè)細(xì)胞增殖
        3.3.12 Wound scratch healing實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移
        3.3.13 Transwell法檢測(cè)細(xì)胞侵襲
        3.3.14 Western blotting分析
        3.3.15 基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)及分析
        3.3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 基因表達(dá)譜芯片檢測(cè)RNF213基因下游應(yīng)答基因
        3.4.2 RNF213調(diào)控MAPK/JNK信號(hào)通路
        3.4.3 免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與RNF213互作蛋白
        3.4.4 RNF213對(duì)MAPK/JNK信號(hào)調(diào)控依賴SOCS1
        3.4.5 SOCS1參與調(diào)控RNF213對(duì)細(xì)胞增殖效應(yīng)
        3.4.6 SOCS1參與調(diào)控RNF213對(duì)細(xì)胞侵襲影響
    3.5 討論
    3.6 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3754857