KptA/Tpt1是廣泛存在于生物中的一種磷酸轉(zhuǎn)移酶,其功能是在tRNA的剪接過(guò)程中將磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到NAD+上,進(jìn)而形成ADP-核糖基化。磷不但是核酸合成、植物生長(zhǎng)、發(fā)育所必須的大量元素,而且是重要的信號(hào)分子。除此之外,磷可影響植物木質(zhì)素的生物合成,通過(guò)改變磷的含量可以改變植物木質(zhì)素的含量和木材密度。杉木(Cunninghamia lanceolate(Lamb.)Hook)是我國(guó)南方主要的用材樹(shù)種,因其材性?xún)?yōu)良而深受人們喜愛(ài)。然而,杉木ClKptA/Tpt1基因目前尚未被克隆,磷是否可調(diào)控該基因的表達(dá)進(jìn)而影響木質(zhì)素的生物合成仍不清楚。因此,本論文基于磷處理后的杉木轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),克隆了ClKptA/7pt1基因,主要研究了以下內(nèi)容:(1)基于杉木轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),克隆了杉木磷酸轉(zhuǎn)移酶ClKptA/Tpt1基因。結(jié)果表明ClKptA/Tpt1基因CDS長(zhǎng)1143 bp,編碼381個(gè)氨基酸。通過(guò)氨基酸序列比對(duì)發(fā)現(xiàn),該蛋白有很強(qiáng)的保守性,存在特征性HGT motif。功能結(jié)構(gòu)域分析發(fā)現(xiàn),KptA/TpJ1基因從原核生物到真核生物普遍存在PTS-2-RNA superfamily亞家族功能結(jié)構(gòu)域�？缒�...

【文章頁(yè)數(shù)】：73 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 引言
    1.2 木質(zhì)素生物合成國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 木質(zhì)素的化學(xué)結(jié)構(gòu)
        1.2.2 木質(zhì)素生物合成途徑關(guān)鍵酶基因的研究進(jìn)展
    1.3 磷對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的研究進(jìn)展
        1.3.1 植物對(duì)低磷脅迫的分子響應(yīng)機(jī)制
        1.3.2 磷對(duì)植物木質(zhì)素生物合成的影響
    1.4 KptA/Tpt1基因的研究進(jìn)展
        1.4.1 KptA/Tpt1基因家族的進(jìn)化史
        1.4.2 KptA/Tpt1基因家族的結(jié)構(gòu)
        1.4.3 KptA/Tpt1基因的功能
    1.5 本文研究的工作設(shè)想
        1.5.1 研究的目的和意義
        1.5.2 研究的內(nèi)容和技術(shù)路線
第2章 ClKptA/Tpt1基因的克隆和生物信息學(xué)分析
    2.1 材料
    2.2 方法
        2.2.1 杉木RNA的提取
        2.2.2 杉木cDNA第一鏈的合成
        2.2.3 目的基因的克隆以及回收
        2.2.4 DH5α感受態(tài)的制備
        2.2.5 ClKptA/Tpt1目的基因片段與載體的連接
        2.2.6 連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化
        2.2.7 ClKptA/Tpt1的生物信息學(xué)分析
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 ClKptA/Tpt1基因的克隆
        2.3.2 CLKptA/Tpt1基因的生物信息學(xué)分析
    2.4 小結(jié)
第3章 ClKptA/Tpt1基因表達(dá)模式的研究以及啟動(dòng)子的克隆
    3.1 材料
    3.2 方法
        3.2.1 不同濃度磷處理杉木及木質(zhì)素的提取
        3.2.2 定量PCR分析
        3.2.3 間苯三酚染色
        3.2.4 染色體步移擴(kuò)增的原理以及步驟
        3.2.5 啟動(dòng)子序列分析
        3.2.6 P_CKplA/Tpt1::GUS表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.2.7 農(nóng)桿菌EH105感受態(tài)細(xì)胞的制備
        3.2.8 電擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        3.2.9 P_ClKptA/Tpt1::GUS楊樹(shù)的轉(zhuǎn)化
        3.2.10 ClKptA/Tpt1亞細(xì)胞定位表載體引物設(shè)計(jì)
    3.3 結(jié)果與分析
    3.4 小結(jié)
第4章 ClKptA/Tpt1基因的功能研究
    4.1 材料
    4.2 方法
        4.2.0 ClKptA/Tpt1基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.1 杉木ClKptA/Tpt1基因過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.2.2 大腸桿菌BL21(star)感受態(tài)的制備
        4.2.3 大腸桿菌BL21(star)轉(zhuǎn)化
        4.2.4 ClKptA/Tpt1基因的原核表達(dá)
        4.2.5 ClKptA/Tpt1目的蛋白的純化及酶活測(cè)定
        4.2.6 ClKptA/Tpt1基因陽(yáng)性工程菌重組質(zhì)粒的提取
        4.2.7 農(nóng)桿菌EH105感受態(tài)細(xì)胞制備
        4.2.8 電擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
        4.2.9 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的楊樹(shù)轉(zhuǎn)化
        4.2.10 楊樹(shù)DNA的提取
        4.2.11 轉(zhuǎn)基因楊樹(shù)RNA的提取
    4.3 結(jié)果與分析
    4.4 小結(jié)
第5章 結(jié)論與討論
    5.1 結(jié)論
    5.2 討論
參考文獻(xiàn)
附錄 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝



本文編號(hào)：3750199