研究背景與目的:頭頸部鱗狀細胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)作為人類最常見的六種癌癥之一,70%以上的患者伴有復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移,是目前嚴重影響人類生存健康的上皮來源惡性腫瘤。因此,尋找有效的治療方案來治療HNSCC成為當前的迫切需要。miRNA是一類內(nèi)生性單鏈非編碼小RNA,長度為20-24個核苷酸,通過結(jié)合到mRNA來調(diào)節(jié)蛋白編碼,存在于動植物當中,廣泛參與轉(zhuǎn)錄后基因的表達和調(diào)控,如細胞分化、增殖、凋亡和細胞周期調(diào)節(jié)等。目前,只有少數(shù)miRNAs的生物學功能被闡明,這些miRNAs被證實廣泛地參與生命過程中的各種生理和病理過程。miRNA-141是miRNA-200家族中的一個,位于12p13.31,是一個成熟的序列,全長共22nt。近期研究發(fā)現(xiàn)miRNA-141可作為癌基因或者抑癌基因,通過調(diào)節(jié)不同的信號傳導(dǎo)通路,在多種癌癥中異常表達,例如胃癌、肝細胞癌、結(jié)腸直腸癌、膀胱癌和卵巢癌,參與惡性腫瘤的增殖、分化、遷移,影響患者的預(yù)后。目前,miRNA-141在頭頸鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用機制尚無明確報道。EGFR即表皮生長因子受體,...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 miRNA-141與EGFR在頭頸鱗狀細胞癌中的表達及相關(guān)性分析
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要試劑和儀器
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 主要儀器
        2.2 研究對象
        2.3 實驗與分析方法
            2.3.1 頭頸鱗癌組織miRNA基因表達譜檢測
            2.3.2 提取組織樣本的總RNA
            2.3.3 RNA濃度和純度的測定
            2.3.4 反轉(zhuǎn)錄(Reverse Transcription,RT)
            2.3.5 實時熒光定量分析
            2.3.6 頭頸部鱗狀細胞癌患者組織中miRNA-141 的差異表達與臨床病理特征之間的關(guān)系
            2.3.7 統(tǒng)計分析
    3 結(jié)果
        3.1 頭頸鱗癌組織miRNA基因芯片檢測
        3.2 生物信息學軟件預(yù)測miR-141 下游靶基因
        3.3 miR-141和EGFR在頭頸部鱗狀細胞癌原發(fā)灶癌組織和癌旁正常組織中的表達
        3.4 頭頸部鱗狀細胞癌患者組織中miRNA-141 的表達與臨床病理特征之間的關(guān)系
    4 討論
第二部分 miR-141 對頭頸鱗癌細胞系中EGFR表達及細胞增殖、凋亡和遷移能力的影響
    5 前言
    6 材料和方法
        6.1 主要試劑和儀器
            6.1.1 主要試劑
            6.1.2 主要儀器
        6.2 研究對象
        6.3 實驗與分析方法
            6.3.1 細胞培養(yǎng)
            6.3.2 細胞轉(zhuǎn)染、雙熒光素酶報告基因檢測
            6.3.3 Western Blot
            6.3.4 RT-PCR檢測INOK、FaDu和 Cal-27 細胞中miR-141和EGFR的表達水平
            6.3.5 MTT實驗
            6.3.6 JC-1 測定
            6.3.7 Transwell實驗
            6.3.8 統(tǒng)計分析
    7 結(jié)果
    8 討論
第三部分 miR-141/EGFR軸抑制頭頸鱗癌轉(zhuǎn)移的體內(nèi)研究
    9 前言
    10 材料和方法
        10.1 主要試劑和儀器
            10.1.1 主要試劑
            10.1.2 主要儀器
        10.2 研究對象
        10.3 實驗與分析方法
            10.3.1 頭頸鱗癌肝轉(zhuǎn)移在體實驗
            10.3.2 蘇木精伊紅染色(HE染色)
            10.3.3 Western Blot測定組織樣本中EGFR、CDK4、bcl-2、MMP2 蛋白的表達
            10.3.4 RT-PCR方法檢測組織樣本中miR-141和EGFR、CDK4、bcl-2、MMP2的表達
    11 結(jié)果
    12 討論
結(jié)論
本研究的創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述 miRNA 和 lncRNA 相互作用與惡性腫瘤相關(guān)性的研究進展
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3749488