SRY是睪丸發(fā)育過程起著關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用的基因之一,定位于Y染色體上。SRY是SOX家族的首個成員,與其它所有成員一樣,有著一個共同特點,都含有一個極其保守DNA結(jié)合域-HMG。迄今為止,已發(fā)現(xiàn)SRY、SOX3、SOX8、SOX9、MIS、WT-1、SF-1、DAX-1等基因,它們參與了性別決定的重要過程。在本課題第二部分采用基因重組技術(shù)構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒,在大腸桿菌中表達(dá)GST-SRY融合蛋白并對其進(jìn)行了純化。實驗中利用PCR技術(shù)將SRY基因進(jìn)行擴增后,將其插入pGEX-6P-1的原核表達(dá)載體中,經(jīng)雙酶切與測序驗證后,pGEX-6P-1/SRY轉(zhuǎn)化到原核表達(dá)菌株E.coli Rosetta DE3,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)GST-SRY融合蛋白,用GST標(biāo)簽純化樹脂對其進(jìn)行純化。本實驗成功構(gòu)建了融合表達(dá)載體pGEX-6P-1/SRY,并誘導(dǎo)和純化GST-SRY融合蛋白,為后續(xù)進(jìn)一步研究該蛋白的分子功能奠定基礎(chǔ)。在我們前期實驗研究中證實了SRY能調(diào)節(jié)WDR5基因表達(dá),兩者并協(xié)同上調(diào)轉(zhuǎn)錄因子SOX9的表達(dá),隨后我們構(gòu)建WDR5過表達(dá)的LNCaP細(xì)胞株,在WDR5上調(diào)SOX9表達(dá)的過程中,發(fā)現(xiàn)SOX...

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語表
摘要
ABSTRACT
第一章：緒論
第二章：GST-SRY融合蛋白原核表達(dá)和純化
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第三章：組蛋白修飾對SOX9基因的表達(dá)的作用
    材料
    方法
    結(jié)果
    討論
    小結(jié)
參考文獻(xiàn)
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號：3749477