促卵泡素(FSH)是一種哺乳動(dòng)物體內(nèi)調(diào)控繁殖性能的重要激素。轉(zhuǎn)基因小鼠模型表明FSH過(guò)表達(dá)可以提高雌性小鼠排卵數(shù)及產(chǎn)仔數(shù)。實(shí)驗(yàn)室與合作單位前期利用細(xì)菌人工染色體和體細(xì)胞核移植將二花臉豬FSH?/?基因轉(zhuǎn)入美系大白豬體內(nèi),獲得了67頭F0代轉(zhuǎn)基因公豬。本研究選擇來(lái)源于同一供體細(xì)胞的2頭F0代轉(zhuǎn)基因公豬與美系大白母豬雜交擴(kuò)繁,對(duì)F1代公豬進(jìn)行了系統(tǒng)的分子鑒定和生物安全評(píng)價(jià)。產(chǎn)仔數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,F0代轉(zhuǎn)基因公豬與配美系大白母豬產(chǎn)仔性能正常。經(jīng)PCR檢測(cè)和拷貝數(shù)驗(yàn)證分析,F1代轉(zhuǎn)基因豬的陽(yáng)性率為50.31%,外源基因的遺傳符合孟德?tīng)柖?8-9個(gè)拷貝的外源FSH?基因和5-6個(gè)拷貝的外源FSH?基因以多拷貝串聯(lián)形式整合到轉(zhuǎn)基因豬的基因組中。實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示,F1代轉(zhuǎn)基因公豬的心、肝、脾、腎、腦、睪丸和附睪中FSH?mRNA總表達(dá)量顯著高于半同胞非轉(zhuǎn)基因公豬,這些組織中檢測(cè)不到FSH?mRNA的表達(dá)。Western blot顯示,F1代轉(zhuǎn)基因公豬垂體中FSH?蛋白表達(dá)量顯著高于半同胞非轉(zhuǎn)基因公豬。放射性免疫分析表明,90和300日齡時(shí)F1代轉(zhuǎn)基因公豬血清中FSH蛋白激素含量顯著高于半同胞非...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 促卵泡素
        1.1.1 促卵泡素的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)
        1.1.2 促卵泡素合成分泌的調(diào)控
        1.1.3 促卵泡素的功能
        1.1.4 FSHb與產(chǎn)仔數(shù)的關(guān)系
        1.1.5 促卵泡素的應(yīng)用
    1.2 細(xì)菌人工染色體
        1.2.1 細(xì)菌人工染色體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
        1.2.2 基于細(xì)菌人工染色體的轉(zhuǎn)基因研究
    1.3 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物制備技術(shù)
        1.3.1 原核顯微注射法
        1.3.2 精子載體法
        1.3.3 逆轉(zhuǎn)錄病毒法
        1.3.4 轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)移法
        1.3.5 體細(xì)胞核移植法
        1.3.6 鋅指核酸酶基因編輯技術(shù)
        1.3.7 轉(zhuǎn)錄激活因子樣效應(yīng)核酸酶基因編輯技術(shù)
        1.3.8 規(guī)律成簇間隔短回文重復(fù)序列/Cas系統(tǒng)基因編輯技術(shù)
    1.4 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用
        1.4.1 動(dòng)物品種改良與培育
        1.4.2 異種器官移植
        1.4.3 生物反應(yīng)器和生物醫(yī)藥
        1.4.4 人類疾病的動(dòng)物模型
    1.5 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的生物安全研究
        1.5.1 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物安全的定義和意義
        1.5.2 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的生物安全研究原則和分子特征檢測(cè)技術(shù)
        1.5.3 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物安全的內(nèi)容
        1.5.4 國(guó)際轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物安全的管理現(xiàn)狀
    1.6 本研究的目的和意義
第二章 研究正文
    2.1 引言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.2.2 DNA的提取
            2.2.2.1 豬DNA及蚯蚓DNA提取
            2.2.2.2 豬腸道微生物DNA提取
            2.2.2.3 土壤微生物DNA提取
        2.2.3 RNA的提取
        2.2.4 c DNA的合成
        2.2.5 蛋白提取及定量
        2.2.6 外源基因PCR檢測(cè)
        2.2.7 拷貝數(shù)檢測(cè)
            2.2.7.1 構(gòu)建GAPDH-FSHa和GAPDH-FSHb雙基因同質(zhì)粒載體
            2.2.7.2 絕對(duì)定量檢測(cè)FSHa和FSHb基因的拷貝數(shù)
        2.2.8 基因表達(dá)分析（RT-q PCR）
        2.2.9 Western blot
        2.2.10 表型測(cè)定
        2.2.11 16S r RNA菌群高通量測(cè)序
        2.2.12 基因水平漂移檢測(cè)
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 轉(zhuǎn)基因豬的PCR檢測(cè)和拷貝數(shù)驗(yàn)證
        2.3.2 FSH基因的表達(dá)分析
        2.3.3 轉(zhuǎn)基因公豬的繁殖性狀分析
        2.3.4 轉(zhuǎn)基因公豬的健康狀況分析
        2.3.5 16S r RNA菌群高通量測(cè)序
        2.3.6 基因水平轉(zhuǎn)移分析
    2.4 討論
        2.4.1 FSHa/b轉(zhuǎn)基因豬的分子鑒定
        2.4.2 FSHa/b轉(zhuǎn)基因公豬的繁殖性能
        2.4.3 FSHa/b轉(zhuǎn)基因豬的生物安全評(píng)價(jià)
    2.5 結(jié)論
    2.6 后期工作展望
參考文獻(xiàn)
附錄
    附錄1 本研究中的引物序列
    附錄2 在讀期間發(fā)表論文
致謝



本文編號(hào)：3749661