為了抑制單倍體釀酒酵母H14的副產(chǎn)物乙醇的合成,使得2,3-丁二醇產(chǎn)量的提升。利用基因工程手段構(gòu)建載體pWCL-pdc1,獲得兩端含40 bp pdc1的同源重組片段-loxP-kanMX-loxP。利用Cre/loxP技術(shù)獲得pdc1缺失菌株S. cerevisiae H14-01 (△pdc1)。并以野生型菌株S. cerevisiae H14為對照,進行搖瓶發(fā)酵試驗。S. cerevisiae H14-01長勢明顯略低于原始菌株。在整個發(fā)酵期間,2,3-丁二醇的最高產(chǎn)量和轉(zhuǎn)化率分別為0.373±0.016 g/L和0.005 g/g,分別較原始菌株提高了37.30%和4.66%,但原始菌株沒有檢測到乙偶姻和2,3-BD生成。另外S. cerevisiae H14-01的乙醇轉(zhuǎn)化率降低了33.24%,但甘油產(chǎn)量提高了15.76%。說明了碳流流向乙醇被阻斷之后,會增加2,3-丁二醇的產(chǎn)量,同時會使此部分碳流流向甘油。因此,并為進一步獲得高產(chǎn)2,3-丁二醇的工程微生物群體奠定了基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株及質(zhì)粒
        1.1.2 酶與試劑
        1.1.3 擴增引物
        1.1.4 培養(yǎng)基
    1.2 方法
        1.2.1 同源重組片段pdc1-loxP-kanMX的獲得及轉(zhuǎn)化
        1.2.2 Cre重組酶消除G418抗性
        1.2.3 重組菌株發(fā)酵性能檢測
2 結(jié)果與分析
    2.1 基因片段loxP-kanMX-loxP的克隆及轉(zhuǎn)化
    2.2 重組菌株的篩選及鑒定
        2.2.1 菌落PCR驗證
        2.2.2 基因組PCR驗證
    2.3 pSH69質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至釀酒酵母
    2.4 Cre重組酶消除G418抗性
    2.5 抗性片段kanMX敲除驗證
    2.6 重組菌株發(fā)酵分析
3 討論與結(jié)論



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