大量研究表明,過量的自由基會對機(jī)體產(chǎn)生氧化應(yīng)激損傷,引發(fā)一系列疾病,加快衰老。對自由基的追蹤方法中,線粒體基質(zhì)靶向超氧化物指示劑環(huán)狀排列黃色熒光蛋白探針(Circularly permuted yellow fluorescent protein,cpYFP)可以實時顯示單個線粒體自發(fā)爆發(fā)超氧化物的生成的方法較為前沿。部分研究者通過構(gòu)建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠模型研究自由基,但對C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠模型的壽命、氧化還原狀態(tài)及行為學(xué)的研究工作很少有人涉及。本研究對C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的主要臟器通過RT-qPCR技術(shù)測定其cpYFP的表達(dá)量,并對C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠和野生型小鼠進(jìn)行壽命、行為學(xué)和主要臟器的部分生物標(biāo)志物的比較,主要研究結(jié)果分述如下:(1)C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的主要臟器的cpYFP表達(dá)量由多到少依次為肺組織、心組織、腦組織、肝組織、腎組織。(2)與野生型小鼠比較,C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的壽命和記憶力顯著的...

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 自由基的概述
        1.1.1 自由基和活性氧的定義及聯(lián)系
        1.1.2 人體中自由基的種類及來源
        1.1.3 自由基與氧化應(yīng)激
        1.1.4 降低自由基的危害
    1.2 生物體內(nèi)的氧自由基研究方法概述
        1.2.1 生物體內(nèi)的氧自由基的產(chǎn)生過程
        1.2.2 生物體內(nèi)的自由基的研究思路
        1.2.3 自由基的測定方法
    1.3 線粒體環(huán)狀排列黃色熒光蛋白探針(MITO-CPYFP)的概述
        1.3.1 Mito-cpYFP的發(fā)現(xiàn)及其探究
        1.3.2 Mito-cpYFP的結(jié)構(gòu)
        1.3.3 Mito-cpYFP的優(yōu)勢及應(yīng)用
    1.4 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的構(gòu)建
        1.4.1 構(gòu)建C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠的意義
        1.4.2 C57BL/6-TgH(mito-cpYFP)小鼠構(gòu)建流程
    1.5 反轉(zhuǎn)錄定量PCR
        1.5.1 SYBR GreenⅠ熒光染料法
        1.5.2 相對定量和絕對定量
    1.6 壽命期限與氧化應(yīng)激
        1.6.1 衰老與壽命期限
        1.6.2 端粒與氧化應(yīng)激對壽命影響
    1.7 動物行為學(xué)表型
        1.7.1 氧化還原狀態(tài)與行為學(xué)
        1.7.2 Mito-cpYFP與行為學(xué)
    1.8 研究的意義和主要內(nèi)容
        1.8.1 研究意義
        1.8.2 本文的主要研究內(nèi)容
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 小鼠飼料配方
        2.1.3 主要材料與試劑
        2.1.4 主要儀器和設(shè)備
    2.2 小鼠MITO-CPYFP的表達(dá)量測定
        2.2.1 小鼠主要臟器的RNA的提取和測定RNA濃度
        2.2.2 小鼠主要臟器組織RNA電泳
        2.2.3 RT-PCR反應(yīng)
        2.2.4 Real Time PCR反應(yīng)
        2.2.5 △△Ct法的相對量計算方法
    2.3 C57BL/6-TGH(MITO-CPYFP)小鼠的壽命實驗方法
        2.3.1 實驗動物的繁殖及飼養(yǎng)
        2.3.2 實驗動物的壽命記錄
    2.4 小鼠行為學(xué)實驗方法
        2.4.1 行為學(xué)實驗動物的飼養(yǎng)與準(zhǔn)備
        2.4.2 曠場實驗
        2.4.3 水迷宮實驗
        2.4.4 爬桿耐力實驗
        2.4.5 傾斜平板實驗
        2.4.6 筑巢實驗
    2.5 生物標(biāo)志物測定
        2.5.1 生物標(biāo)志物測定的實驗動物
        2.5.2 小鼠的臟器指數(shù)測定和組織勻漿的制備
        2.5.3 BCA蛋白濃度測定
        2.5.4 超氧化物歧化酶(SOD)活性測定
        2.5.5 過氧化氫酶(CAT)測定
        2.5.6 總一氧化氮合成酶(T-NOS)測定
        2.5.7 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)測定
        2.5.8 丙二醛(MDA)測定
        2.5.9 過氧化氫(H₂O₂)的測定
        2.5.10 超氧陰離子自由基(O2
·-)的測定
        2.5.11 氧化還原電位(Eh)的測定
    2.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 小鼠的MITO-CPYFP的表達(dá)量
        3.1.1 野生型及轉(zhuǎn)基因小鼠各組織RNA電泳
        3.1.2 野生型及轉(zhuǎn)基因小鼠各組織cpYFP半定量結(jié)果
        3.1.3 野生型及轉(zhuǎn)基因小鼠各組織cpYFP定量結(jié)果
    3.2 野生型及轉(zhuǎn)基因小鼠的壽命結(jié)果
    3.3 野生型及轉(zhuǎn)基因小鼠的行為學(xué)實驗結(jié)果
        3.3.1 曠場實驗
        3.3.2 水迷宮實驗
        3.3.3 爬桿實驗
        3.3.4 協(xié)調(diào)運(yùn)動能力實驗
        3.3.5 筑巢實驗
    3.4 小鼠主要臟器的臟器指數(shù)和蛋白濃度測定結(jié)果
        3.4.1 小鼠的主要臟器的臟器指數(shù)測定結(jié)果
        3.4.2 小鼠的主要臟器的蛋白濃度測定結(jié)果
    3.5 小鼠主要臟器組織的抗氧化功能的測定結(jié)果
        3.5.1 小鼠主要臟器組織的過氧化氫酶活力的測定結(jié)果
        3.5.2 小鼠主要臟器組織的總超氧化物歧化酶活力的測定結(jié)果
        3.5.3 小鼠主要臟器組織的總一氧化氮合成酶活力的測定結(jié)果
        3.5.4 小鼠主要臟器組織的谷胱甘肽過氧化氫酶活力的測定結(jié)果
        3.5.5 小鼠主要臟器組織的丙二醛活力的測定結(jié)果
        3.5.6 小鼠主要臟器組織的過氧化氫水平的測定結(jié)果
        3.5.7 小鼠主要臟器組織的超氧陰離子自由基水平的測定結(jié)果
        3.5.8 小鼠主要臟器組織的氧化還原電位水平的測定結(jié)果
第4章 總結(jié)與展望
    4.1 總結(jié)
    4.2 存在的問題與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3743133

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