發(fā)布時(shí)間：2023-02-13 18:49

　　多花黃精(Polygonatum cyrtonema Hua)為百合科(Liliaceae)黃精屬(Polygonatum Mill.)多年生草本植物,集藥用、食用、美容和觀賞價(jià)值于一身,具有廣闊的開發(fā)利用前景。多花黃精根狀莖主要含多糖、黃酮、蒽醌、薯蕷皂苷、木脂素及對(duì)人體有用的多種氨基酸等,性平、味甘,具有滋陰潤(rùn)肺、提高人體免疫力、補(bǔ)中益氣的作用和功效,是為滋補(bǔ)上品。但由于多花黃精生長(zhǎng)周期長(zhǎng),種子繁殖需要5年以上,根狀莖繁殖也至少需要3年,傳統(tǒng)的無(wú)性繁育技術(shù)不僅使黃精優(yōu)良性狀難以保存,而且繁殖效率較低,極大地限制了黃精的規(guī)�；瘮U(kuò)繁。近年來(lái)隨著人們對(duì)黃精的需求量與日俱增,野生資源已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足生產(chǎn)的需要,工廠化生產(chǎn)勢(shì)在必行。植物組織培養(yǎng)技術(shù)不僅可以很好地保存黃精的優(yōu)良性狀,而且還可以消除了季節(jié)等外在因素的影響,從而在可控的環(huán)境下顯著提高增殖系數(shù)。因此,本研究以多花黃精為材料,對(duì)多花黃精進(jìn)行無(wú)菌體系的建立,并誘導(dǎo)不定芽的生長(zhǎng),優(yōu)化離體培養(yǎng)條件,再對(duì)優(yōu)化后的材料進(jìn)行甾體皂苷的測(cè)定,同時(shí)克隆得到多花黃精PcCIGR和PcSCL21基因的cDNA、gDNA全長(zhǎng)序列,分析PcCIGR和PcSCL...

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮寫詞
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 黃精屬植物離體培養(yǎng)無(wú)菌體系的研究進(jìn)展
    2 多花黃精離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及不定芽增殖研究進(jìn)展
    3 薯蕷皂苷的研究進(jìn)展
        3.1 薯蕷皂苷提取的研究進(jìn)展
        3.2 薯蕷皂苷測(cè)定的研究進(jìn)展
    4 多花黃精生長(zhǎng)發(fā)育相關(guān)基因的研究進(jìn)展
        4.1 CIGR基因的研究進(jìn)展
        4.2 SCL21 基因的研究進(jìn)展
    5 本研究意義和主要內(nèi)容
        5.1 研究意義
        5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 野生黃精無(wú)菌體系的建立
    第一節(jié) 外植體預(yù)處理對(duì)黃精無(wú)菌體系建立的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
        2 結(jié)果與分析
        3 討論
    第二節(jié) 不同消毒試劑配比對(duì)無(wú)菌體系建立的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
            1.3 培養(yǎng)條件
        2 結(jié)果與分析
            2.1 乙醇與次氯酸鈉不同時(shí)間配合處理對(duì)外植體的影響
            2.2 乙醇與氯化汞不同時(shí)間配合處理對(duì)外植體的影響
        3 討論
    第三節(jié) 取材時(shí)間和激素配比對(duì)黃精不定芽誘導(dǎo)的影響
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
                1.2.1 取材時(shí)間對(duì)野生黃精不定芽誘導(dǎo)的影響
                1.2.2 激素配比對(duì)野生黃精不定芽誘導(dǎo)的影響
        2 結(jié)果與分析
            2.1 不同取材時(shí)間對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
            2.2 不同激素配比對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響
        3 討論
第三章 多花黃精離體培養(yǎng)條件優(yōu)化及不定芽的增殖
    1 材料與方法
        1.1 材料
        1.2 方法
            1.2.1 不同光質(zhì)對(duì)多花黃精的處理
            1.2.2 不同光周期對(duì)多花黃精的處理
            1.2.3 不同激素配比對(duì)多花黃精的處理
        1.3 培養(yǎng)條件
        1.4 數(shù)據(jù)處理
    2 結(jié)果與分析
        2.1 光周期對(duì)多花黃精不定芽增殖的影響
        2.2 光質(zhì)對(duì)多花黃精不定芽增殖的影響
        2.3 激素配比對(duì)多花黃精不定芽增殖的影響
    3 討論
第四章 光與激素處理下多花黃精根狀莖中薯蕷皂苷含量的影響
    1 材料與方法
        1.1 材料
            1.1.1 材料與試劑
            1.1.2 儀器與設(shè)備
        1.2 方法
            1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
            1.2.2 樣品預(yù)處理
            1.2.3 色譜條件
        1.3 數(shù)據(jù)分析
    2 結(jié)果與分析
        2.1 HPLC分析方法的建立
            2.1.1 柱溫和流動(dòng)相的選擇
            2.1.2 樣品處理方法的優(yōu)化
        2.2 HPLC分析方法的考察
            2.2.1 線性范圍和檢出限
            2.2.2 精密度試驗(yàn)
            2.2.3 重復(fù)性試驗(yàn)
            2.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)
            2.2.5 加樣回收率試驗(yàn)
        2.3 光處理下多花黃精根狀莖中薯蕷皂苷含量的影響
        2.4 激素處理下多花黃精根狀莖中薯蕷皂苷含量的影響
        2.5 培養(yǎng)天數(shù)對(duì)多花黃精根狀莖中薯蕷皂苷含量的影響
    3 討論
第五章 多花黃精CIGR基因克隆、亞細(xì)胞定位及其生物信息學(xué)及表達(dá)分析
    第一節(jié) 多花黃精CIGR基因克隆及其生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
                1.2.1 CIGR基因的篩選與克隆
                1.2.2 總DNA、RNA的提取及c DNA的合成
                1.2.3 多花黃精g DNA克隆
                1.2.4 生物信息學(xué)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 多花黃精CIGR基因c DNA及 g DNA的獲得及結(jié)構(gòu)
            2.2 CIGR基因基本理化性質(zhì)分析
            2.3 CIGR聚類分析
            2.4 CIGR蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析
        3 討論
    第二節(jié) 多花黃精CIGR基因的亞細(xì)胞定位分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
                1.2.1 總RNA的提取與c DNA合成
                1.2.2 CIGR基因序列酶切位點(diǎn)預(yù)測(cè)與分析
                1.2.3 CIGR亞細(xì)胞定位載體構(gòu)建引物設(shè)計(jì)
                1.2.4 目的片段的獲得
                1.2.5 提取重組質(zhì)粒
                1.2.6 載體的酶切與重組載體的構(gòu)建
                1.2.7 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞EHA105
                1.2.8 農(nóng)桿菌侵染受體(多花黃精葉片、洋蔥內(nèi)表皮)
                1.2.9 激光顯微共聚焦顯微鏡觀察GFP信號(hào)
        2 結(jié)果與分析
            2.1 重組載體的構(gòu)建與鑒定
            2.2 多花黃精CIGR蛋白的亞細(xì)胞定位
        3 討論
    第三節(jié) 黃精CIGR基因在不同組織部位的表達(dá)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗(yàn)試劑及儀器
            1.3 方法
                1.3.1 黃精總RNA的提取及c DNA合成
                1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)與擴(kuò)增程序
            1.4 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
        3 討論
    第四節(jié) 黃精CIGR基因在不同光、激素和培養(yǎng)天數(shù)處理下的表達(dá)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 試驗(yàn)試劑及儀器
            1.3 方法
                1.3.1 試驗(yàn)材料的處理
                1.3.2 黃精總RNA的提取及c DNA合成
                1.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)與擴(kuò)增程序
            1.4 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 在不同光質(zhì)和光周期處理下多花黃精CIGR的表達(dá)分析
            2.2 在不同激素處理下多花黃精CIGR的表達(dá)分析
            2.3 在不同培養(yǎng)天數(shù)下多花黃精CIGR基因的表達(dá)分析
        3 討論
第六章 多花黃精SCL21 基因克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析
    第一節(jié) 多花黃精SCL21 基因克隆、生物信息學(xué)分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
                1.2.1 SCL21 基因的克隆
                1.2.2 總DNA、RNA的提取及c DNA的合成
                1.2.3 多花黃精g DNA克隆
                1.2.4 PCR擴(kuò)增體系及程序
                1.2.5 目的片段回收、克隆轉(zhuǎn)化與測(cè)序
                1.2.6 黃精SCL21 生物信息學(xué)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 多花黃精SCL21 基因ORF的驗(yàn)證
            2.2 多花黃精總RNA的提取與質(zhì)量檢測(cè)
            2.3 多花黃精g DNA的克隆
            2.4 多花黃精SCL21 蛋白同源性分析
            2.5 多花黃精SCL21 蛋白理化性質(zhì)分析
            2.6 多花黃精SCL21 基因結(jié)構(gòu)分析
            2.7 多花黃精SCL21 蛋白保守結(jié)構(gòu)域分析
            2.8 多花黃精SCL21 蛋白的亞細(xì)胞定位與信號(hào)肽預(yù)測(cè)
            2.9 多花黃精SCL21 跨膜結(jié)構(gòu)與磷酸位點(diǎn)預(yù)測(cè)
            2.10 多花黃精SCL21 蛋白蜷曲螺旋結(jié)構(gòu)的分析
            2.11 多花黃精SCL21 蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析與三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)
            2.12 SCL21 蛋白motif分析
            2.13 SCL21 系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
            2.14 多花黃精SCL21 蛋白互作關(guān)系分析
        3 討論
    第二節(jié) 多花黃精SCL21 基因的表達(dá)模式分析
        1 材料與方法
            1.1 材料
            1.2 方法
                1.2.1 多花黃精總RNA的提取及c DNA的合成
                1.2.2 熒光定量PCR分析
                1.2.3 試驗(yàn)材料的處理
            1.3 數(shù)據(jù)分析
        2 結(jié)果與分析
            2.1 多花黃精總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)
            2.2 SCL21 基因在多花黃精不同組織部位中的表達(dá)模式分析
            2.3 多花黃精SCL21 在光質(zhì)與光周期處理下的表達(dá)情況
            2.4 多花黃精SCL21 基因在激素處理下的表達(dá)情況
            2.5 多花黃精SCL21 基因在不同培養(yǎng)天數(shù)下的表達(dá)情況
        3 討論
第七章 小結(jié)與展望
    1 小結(jié)
        1.1 多花黃精無(wú)菌體系的建立
        1.2 多花黃精離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化及不定芽增殖
        1.3 HPLC法測(cè)定多花黃精根狀莖中薯蕷皂苷
        1.4 多花黃精CIGR基因克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析
        1.5 多花黃精SCL21 基因克隆、生物信息學(xué)及表達(dá)分析
    2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 A 圖例及圖版說(shuō)明
附錄 B 本研究使用的基因序列
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文情況
致謝



本文編號(hào)：3742116