發(fā)布時間：2023-02-12 13:28

　　在長期的進(jìn)化過程中,真核生物線粒體所包含的大部分基因都轉(zhuǎn)移到了細(xì)胞核中,線粒體只保留了很少一部分基因。這部分基因通常都需要在細(xì)胞核編碼因子的幫助下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后加工才能夠正常行使功能,加工過程發(fā)生缺陷會影響線粒體的功能,從而影響植物的生長發(fā)育,導(dǎo)致種子空癟、生長遲緩、不能萌發(fā)等。對植物線粒體功能進(jìn)行分子生物學(xué)水平上的研究,有助于深入了解線粒體與植物生長發(fā)育之間的關(guān)系,促進(jìn)線粒體水平上的分子輔助育種。在本論文中,我們利用農(nóng)桿菌侵染的技術(shù)手段,對擬南芥(Arabbidopsis thalana)線粒體中8個同時需要剪接與編輯的基因進(jìn)行了轉(zhuǎn)基因株系的構(gòu)建,構(gòu)建中所使用的8個基因均為已正常剪接且編輯的形式,同時以釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)細(xì)胞色素c氧化酶亞基4(ScCOX4)的起始29個氨基酸作為信號肽,以實現(xiàn)表達(dá)蛋白的線粒體定位。通過上述方法,我們嘗試改變線粒體基因功能對細(xì)胞核編碼因子的依賴,并通過表型觀察及生理生化指標(biāo)的測定等,探索在新的表達(dá)方式下,線粒體的功能狀態(tài)及植物的生長發(fā)育狀況。然而在對線粒體基因電子傳遞鏈復(fù)合物Ⅰ的亞基4(Atnad4)與亞基7(At...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
符號說明
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1. 植物線粒體基因研究進(jìn)展
        1.1 植物線粒體基因組
        1.2 植物線粒體基因表達(dá)與細(xì)胞核的關(guān)系
            1.2.1 植物線粒體基因的轉(zhuǎn)錄
            1.2.2 植物線粒體基因的轉(zhuǎn)錄后加工
        1.3 植物線粒體的生物學(xué)功能
    2. SPX類蛋白及玉米雌穗花性別分化的研究進(jìn)展
        2.1 植物中SPX類蛋白的分類
        2.2 植物SPX類蛋白的功能
            2.2.1 SPX蛋白的功能
            2.2.2 SPX-EXS蛋白的功能
            2.2.3 SPX-MFS蛋白的功能
            2.2.4 SPX-RING蛋白的功能
        2.3 玉米雌穗花的性別分化
        2.4 赤霉素的作用機制
    3. 研究目的與意義
第二章 實驗材料與方法
    1. 實驗材料和試劑
        1.1 植物材料
        1.2 實驗材料及試劑
    2. 實驗方法
        2.1 植物的培養(yǎng)
            2.1.1 植物的滅菌處理
            2.1.2 植物的培養(yǎng)條件
        2.2 植物基因組DNA的提取
            2.2.1 試劑配制
            2.2.2 提取步驟
        2.3 植物總RNA的提取
        2.4 RNA的反轉(zhuǎn)錄
        2.5 PCR程序的設(shè)定
        2.6 Real-time PCR
        2.7 遺傳轉(zhuǎn)化操作
            2.7.1 抗生素及培養(yǎng)基的配制
            2.7.2 轉(zhuǎn)化操作
            2.7.3 載體的構(gòu)建
        2.8 酵母雙雜交實驗
        2.9 轉(zhuǎn)基因擬南芥的構(gòu)建
        2.10 瓊脂糖凝膠電泳及DNA片段的回收
        2.11 質(zhì)粒的提取
        2.12 擬南芥高表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系的篩選
        2.13 擬南芥的鹽脅迫處理
        2.14 擬南芥開花時間的統(tǒng)計
第三章 實驗結(jié)果
    1. 擬南芥線粒體基因在細(xì)胞核中的表達(dá)
        1.1 擬南芥線粒體基因的克隆
        1.2 信號肽序列的添加
        1.3 擬南芥轉(zhuǎn)基因株系的構(gòu)建
        1.4 轉(zhuǎn)基因高表達(dá)株系的篩選
        1.5 擬南芥Amad7與Atnad4的轉(zhuǎn)基因株系與野生型無明顯生長差異
        1.6 鹽脅迫處理的轉(zhuǎn)基因株系與野生型之間無明顯生長差異
        1.7 T3代轉(zhuǎn)基因純合株系的基因表達(dá)量下降至與野生型一致
    2. 玉米基因ZmSpx1的功能研究
        2.1 Mu轉(zhuǎn)座子插入突變體的鑒定
        2.2 突變體中ZmSpx1存在錯誤剪接形式
        2.3 錯誤剪接形式改變了ZmSPX1的蛋白結(jié)構(gòu)
        2.4 突變蛋白Zmspx1與DELLA蛋白d8無明顯相互作用
第四章 討論
附錄
參考文獻(xiàn)
致謝
附件



本文編號：3741195