目的構(gòu)建單純皰疹病毒2型(herpes simplex virus type 2,HSV-2)UL27和UL29雙基因shRNA慢病毒表達(dá)載體,并檢測(cè)其在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)。方法針對(duì)HSV-2 UL27、UL29基因,各篩選干擾效率最佳的shRNA片段相連接,構(gòu)建雙基因共表達(dá)慢病毒載體,并轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞作為干擾組,另設(shè)空白對(duì)照組(不做任何處理)和陰性對(duì)照組(轉(zhuǎn)染不針對(duì)任何基因的慢病毒載體)。轉(zhuǎn)染48或24 h后接種HSV-2,RT-PCR和Western blot法檢測(cè)各組細(xì)胞中目的基因mRNA和蛋白的表達(dá)水平,MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞的存活率。結(jié)果干擾組UL27和UL29基因mRNA的表達(dá)抑制率可達(dá)(78.61±2.14)%和(84.86±1.52)%,同時(shí)gB和ICP8蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P均<0.05),細(xì)胞的存活明顯率提高(P均<0.05)。結(jié)論構(gòu)建的HSV-2 UL27、UL29雙基因shRNA重組慢病毒表達(dá)載體能在HEK293細(xì)胞中表達(dá),為后續(xù)HSV-2的基因治療奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒、細(xì)胞及載體
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3雙基因shR NA重組慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.4細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染
    1.5雙基因mR NA在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表達(dá)的檢測(cè)
    1.6 雙蛋白在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中表達(dá)的檢測(cè)
    1.7 轉(zhuǎn)染細(xì)胞存活率的檢測(cè)
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 雙基因sh R N A重組慢病毒表達(dá)載體的鑒定
    2.2 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率
    2.3 各組細(xì)胞的病變情況
    2.4 UL27和UL29基因m R N A在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)
    2.5 g B和ICP8蛋白在HEK293細(xì)胞中的表達(dá)
    2.6 各組HEK293細(xì)胞的存活率
3 討論



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