目的通過(guò)遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因克隆及其轉(zhuǎn)錄組研究,為遠(yuǎn)志的種質(zhì)改良與皂苷類(lèi)成分的生物合成提供借鑒。方法（1）采用RT-PCR和RACE技術(shù)對(duì)遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶（SE）基因進(jìn)行全長(zhǎng)序列克隆,并對(duì)SE基因全長(zhǎng)序列及其編碼的氨基酸序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析;（2）采用RT-q PCR和HPLC技術(shù)分別測(cè)定遠(yuǎn)志不同部位（根、莖、葉）SE基因相對(duì)表達(dá)量及細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析探究?jī)烧唛g的關(guān)系;（3）通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,對(duì)遠(yuǎn)志轉(zhuǎn)錄本和基因?qū)用鏀?shù)據(jù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)與功能注釋,并對(duì)遠(yuǎn)志三萜皂苷生物合成通路及三萜骨架修飾通路進(jìn)行研究,篩選參與三萜代謝過(guò)程的關(guān)鍵酶基因。結(jié)果（1）克隆得到遠(yuǎn)志SE基因的c DNA全長(zhǎng)序列為1652 bp,含28 bp5’UTR,37 bp 3’UTR和1587 bp ORF區(qū),編碼528個(gè)氨基酸蛋白,Gen Bank登錄號(hào)為MG917041。BLAST比對(duì)分析結(jié)果顯示遠(yuǎn)志SE基因序列與已登錄的其他物種具有較高同源性。遠(yuǎn)志SE基因編碼蛋白的相對(duì)分子量和理論等電點(diǎn)分別為57882.34 Da和8.77,該蛋白屬于PLN02985（角鯊烯單加氧酶,即SE）和FAD-binding-3超家族,... 

【文章頁(yè)數(shù)】：105 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號(hào)說(shuō)明
前言
第一章 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因的克隆及序列分析研究
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 植物材料
            1.2 菌株和載體
            1.3 酶和試劑
            1.4 培養(yǎng)基類(lèi)型
            1.5 儀器及設(shè)備
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 遠(yuǎn)志根總RNA的提取
            2.2 cDNA第一鏈的合成
            2.3 引物設(shè)計(jì)與合成
            2.4 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因核心片段擴(kuò)增
            2.5 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因5'RACE擴(kuò)增
            2.6 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因3'RACE擴(kuò)增
            2.7 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因cDNA全長(zhǎng)擴(kuò)增
            2.8 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因生物信息學(xué)分析
    結(jié)果與討論
        1 遠(yuǎn)志總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因核心片段擴(kuò)增與分析
        3 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因5'RACE擴(kuò)增與分析
        4 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因3'RACE擴(kuò)增與分析
        5 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因全長(zhǎng)序列拼接
        6 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因全長(zhǎng)序列擴(kuò)增與分析
        7 遠(yuǎn)志鯊烯環(huán)氧酶基因生物信息學(xué)分析
            7.1 ORF分析及BLAST分析
            7.2 蛋白基本理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)功能預(yù)測(cè)
            7.3 ClustalX多重序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析
    小結(jié)
第二章 鯊烯環(huán)氧酶基因?qū)?xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量影響研究
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 植物材料
            1.2 酶和試劑
            1.3 儀器及設(shè)備
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷的含量測(cè)定
            2.2 遠(yuǎn)志SE基因的表達(dá)分析
            2.3 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量與SE基因表達(dá)量相關(guān)分析
    結(jié)果與討論
        1 方法學(xué)考察
            1.1 線性范圍考察
            1.2 精密度試驗(yàn)
            1.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)
            1.4 重復(fù)性試驗(yàn)
            1.5 加樣回收率試驗(yàn)
        2 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量測(cè)定
        3 遠(yuǎn)志總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        4 RT-qPCR熔解曲線與擴(kuò)增曲線
            4.1 熔解曲線
            4.2 擴(kuò)增曲線
        5 遠(yuǎn)志SE基因相對(duì)表達(dá)量
        6 細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷含量與SE基因表達(dá)量相關(guān)分析
    小結(jié)
第三章 基于轉(zhuǎn)錄組的遠(yuǎn)志皂苷生物合成關(guān)鍵酶基因挖掘研究
    材料與方法
        1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 植物材料
            1.2 試劑
            1.3 儀器及設(shè)備
        2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1 遠(yuǎn)志總RNA的提取
            2.2 文庫(kù)構(gòu)建及Illumina測(cè)序
            2.3 denovo組裝
            2.4 轉(zhuǎn)錄組的功能注釋
    結(jié)果與討論
        1 遠(yuǎn)志總RNA的提取及質(zhì)量檢測(cè)
        2 從頭組裝
        3 基因功能注釋
            3.1 NR庫(kù)注釋
            3.2 GO注釋
            3.3 COG注釋
            3.4 KEGG注釋
        4 三萜皂苷生物合成通路相關(guān)基因
    小結(jié)
第四章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
個(gè)人簡(jiǎn)介
開(kāi)題、中期及學(xué)位論文答辯委員組成


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3730308