近年來,醫(yī)療和養(yǎng)殖中抗生素濫用引起的抗生素耐藥基因（antibiotic resistance genes,ARGs）已經(jīng)成為了一種危害公眾健康的新型環(huán)境污染物。目前,針對水產(chǎn)品耐藥菌和ARGs的研究較少,關(guān)于水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境ARGs污染研究結(jié)果表明,養(yǎng)殖水體和底泥環(huán)境中ARGs污染嚴重,且ARGs種類繁多。因此,開展養(yǎng)殖水產(chǎn)品中水產(chǎn)品中抗生素耐藥菌和ARGs污染分布研究,同時建立ARGs檢測方法是十分必要的。本研究以大黃魚、鯽魚、黃顙魚、青魚、泥鰍、羅氏沼蝦6種浙江省主要消費水產(chǎn)品為研究對象,采用磺胺嘧啶、硫酸慶大霉素、恩諾沙星、頭孢氨芐、土霉素、氯霉素抗性平板篩選耐藥細菌,基于16S rDNA序列分析完成菌株的鑒定,通過藥敏試驗分析分離菌株對復(fù)方新諾明、慶大霉素、恩諾沙星、頭孢氨芐、四環(huán)素、氯霉素6種抗生素的敏感性,采用PCR對sul2（磺胺類）、aac（6’）-Ib（氨基糖苷類）、qnrS（喹諾酮類）、blaPSE（β-內(nèi)酰胺類）、tetA（四環(huán)素類）、cmlA（氯霉素類）、floR（氯霉素類）共7種耐藥基因進行擴增,評估菌株的耐藥表型及基因型的符合情況,針對aac（6’）-Ib、c... 

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫、符號清單和術(shù)語表
第1章 引言
    1.1 抗生素及耐藥基因
        1.1.1 抗生素
        1.1.2 耐藥基因
    1.2 水產(chǎn)品中抗生素耐藥基因(ARGs)的污染現(xiàn)狀
    1.3 細菌耐藥性檢測方法的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 傳統(tǒng)微生物抑制方法
        1.3.2 分子生物學技術(shù)
    1.4 立題依據(jù)與研究內(nèi)容
        1.4.1 立題依據(jù)
        1.4.2 研究內(nèi)容
第2章 養(yǎng)殖水產(chǎn)品耐藥菌分離及16S rDNA鑒定
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 樣品采集
        2.1.2 主要儀器與試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 樣品處理
        2.2.2 菌株分離培養(yǎng)
        2.2.3 菌株純化
        2.2.4 菌株鑒定
        2.2.5 數(shù)據(jù)分析
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 養(yǎng)殖水產(chǎn)品中的抗生素耐藥菌數(shù)
        2.3.2 菌株分離鑒定結(jié)果
        2.3.3 養(yǎng)殖水產(chǎn)品中耐藥細菌的分布
    2.4 本章小結(jié)
第3章 分離菌株的耐藥表型及基因型分析
    3.1 材料與儀器
        3.1.1 陽性菌株
        3.1.2 分離菌株
        3.1.3 主要儀器與試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 藥物敏感性試驗
        3.2.2 藥敏試驗結(jié)果判定標準
        3.2.3 ARGs PCR擴增
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 藥敏試驗結(jié)果
        3.3.2 分離菌株耐藥表型與耐藥基因符合率分析
    3.4 本章小結(jié)
第4章 ARGs多重PCR檢測方法的建立
    4.1 材料與儀器
        4.1.1 陽性菌株
        4.1.2 樣品采集
        4.1.3 主要儀器與試劑
    4.2 實驗方法
        4.2.1 引物的設(shè)計
        4.2.2 多重PCR方法的建立
        4.2.3 多重PCR方法的特異性試驗
        4.2.4 多重PCR方法的靈敏度試驗
        4.2.5 多重PCR方法檢測市售水產(chǎn)品ARGs污染
    4.3 結(jié)果與討論
        4.3.1 多重PCR產(chǎn)物測序結(jié)果
        4.3.2 多重PCR方法的特異性
        4.3.3 多重PCR方法的靈敏度
        4.3.4 多重PCR方法檢測市售水產(chǎn)品ARGs污染
    4.4 本章小結(jié)
第5章 ARGs實時熒光定量PCR檢測方法的建立
    5.1 材料與儀器
        5.1.1 陽性菌株
        5.1.2 主要儀器與試劑
    5.2 實驗方法
        5.2.1 質(zhì)粒標準品的構(gòu)建
        5.2.2 qPCR反應(yīng)條件
        5.2.3 目的基因的標準曲線建立
        5.2.4 市售水產(chǎn)品ARGs qPCR分析
        5.2.5 數(shù)據(jù)分析
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 質(zhì)粒DNA測序結(jié)果
        5.3.2 標準曲線
        5.3.3 市售水產(chǎn)品ARGs相對豐度
        5.3.4 ARGs與intⅠ1相對豐度間相關(guān)性分析
    5.4 本章小結(jié)
第6章 結(jié)論、創(chuàng)新點與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 創(chuàng)新點
    6.3 展望
參考文獻
附錄一 136株菌株菌種鑒定結(jié)果
附錄二 研究生期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[7]常見柔魚科魷魚品種的分子鑒定技術(shù)研究[D]. 葉劍.浙江工商大學 2017
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本文編號：3730284