水稻細菌性條斑病菌Xanthomonas oryzae pv.oryzicola缺失clpX和speE基因?qū)ζ渲虏⌒缘挠?/H1>
發(fā)布時間：2022-12-25 17:35
由水稻細菌性條斑病菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,簡稱Xoc）侵染水稻引起的水稻細菌性條斑�。≧ice bacterial leaf streak,簡稱BLS）是危害水稻生產(chǎn)的一種重要植物細菌病害。該病害已成為繼稻瘟病、白葉枯病、稻紋枯病后的又一大水稻病害,對中國和東南亞稻區(qū)的水稻造成嚴重危害。目前,有關(guān)細菌Xoc的致病機制尚缺乏全面深入的研究。鑒定Xoc的致病相關(guān)基因,解析不同基因的功能,對于揭示該病菌的致病機制具有重要意義。本研究利用轉(zhuǎn)座子Tn5對水稻細菌性條斑病菌Xoc RS105進行轉(zhuǎn)座子誘變,構(gòu)建含有1500個菌株的突變體庫。經(jīng)過活體篩選,從1500個轉(zhuǎn)座子插入突變體中獲得2株致病性發(fā)生改變的突變體,編號分別為R-160和R-168。通過反向PCR方法擴增出兩個突變體中轉(zhuǎn)座子Tn5插入位點的側(cè)翼序列,序列比對后發(fā)現(xiàn)突變體R-160和R-168中轉(zhuǎn)座子Tn5分別插入到編碼依賴于ATP的Clp蛋白酶ATP結(jié)合亞基基因clp X和亞精胺合成酶的編碼基因spe E中。在此基礎(chǔ)上,通過同源重組分別從Xoc RS105中敲除clp X和spe E基因獲...
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
1.1 水稻細菌性條斑病
1.1.1 水稻細菌性條斑病菌的特征及其危害
1.1.2 水稻細菌性條斑病的防治
1.2 水稻細菌性條斑病菌的研究進展
1.2.1 有關(guān)Ⅲ型分泌系統(tǒng)的研究
1.2.2 有關(guān)DSF依賴性群體感應系統(tǒng)的研究
1.2.3 胞外多糖等其它相關(guān)研究
1.3 ClpX在細菌中功能
1.4 亞精胺合成酶在生物體內(nèi)的功能
1.5 立題依據(jù)
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 供試菌株
2.1.2 供試質(zhì)粒
2.1.3 供試引物
2.1.4 培養(yǎng)基
2.1.5 實驗試劑
2.1.6 供試種子
2.2 實驗方法
2.2.1 小量質(zhì)粒的提取
2.2.2 水稻細菌性條斑病菌基因組DNA的提取
2.2.3 大腸桿菌感受態(tài)細胞制備方法
2.2.4 致病性測定方法
2.2.5 轉(zhuǎn)座子Tn5插入突變體庫的構(gòu)建
2.2.6 致病能力相關(guān)基因的初步鑒定
2.2.7 缺失菌株的構(gòu)建
2.2.8 基因互補菌株的構(gòu)建
2.2.9 野生型XocRS105及其衍生菌株表型測定
3 結(jié)果與分析
3.1 篩選獲得2個與致病性有關(guān)的轉(zhuǎn)座子插入突變體
3.2 構(gòu)建基因缺失菌株和互補菌株以及致病能力的驗證
3.2.1 構(gòu)建clp X和 spe E的基因敲除載體
3.2.2 獲得clp X和 spe E基因缺失菌株
3.2.3 構(gòu)建基因互補載體
3.2.4 獲得基因互補菌株
3.2.5 基因clp X和 spe E參與Xoc RS105 對水稻的致病性
3.3 clp X與 spe E基因的鑒定
3.3.1 clpX基因的鑒定
3.3.2 speE基因的鑒定
3.4 野生型Xoc RS105、Δclp X及其互補菌株致病性相關(guān)型的測定
3.4.1 運動能力的測定
3.4.2 產(chǎn)胞外蛋白酶能力的測定
3.4.3 產(chǎn)胞外多糖能力的測定
3.4.4 細菌生長曲線的測定
3.4.5 抗脅迫能力的測定
3.4.6 耐熱能力的測定
3.4.7 在水稻葉片內(nèi)定殖能力測定
3.5 野生型Xoc RS105、Δspe E及其互補菌株致病性相關(guān)型的測定
3.5.1 運動能力測定
3.5.2 抗脅迫能力的測定
3.5.3 耐熱能力的測定
3.5.4 在水稻葉片內(nèi)定殖能力測定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]OsBGLU19 and OsBGLU23 regulate disease resistance to bacterial leaf streak in rice[J]. LI Bei-bei,LIU Ying-gao,WU Tao,WANG Ji-peng,XIE Gui-rong,CHU Zhao-hui,DING Xin-hua. Journal of Integrative Agriculture. 2019(06)
[2]水稻細菌性條斑病4種接種方法的比較[J]. 趙嚴,羅登杰,何圣賢,劉芳. 亞熱帶農(nóng)業(yè)研究. 2018(04)
[3]水稻細菌性條斑病防治研究進展[J]. 湯帥,楊遠航,潘素君,林木青,戴良英,李魏. 農(nóng)學學報. 2018(11)
[4]An Inner Membrane Protein（Imp） of Xanthomonas oryzae pv. oryzicola Functions in Carbon Acquisition, EPS Production, Bacterial Motility and Virulence in Rice[J]. CAI Lu-lu,ZOU Li-fang,GE Ling,XUE Xiao-bo,ZOU Hua-song,CHEN Gong-you. Journal of Integrative Agriculture. 2014(12)
[5]解淀粉芽孢桿菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果[J]. 張榮勝,戴秀華,陳志誼. 江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2014(10)
[6]水稻細菌性條斑病研究進展[J]. 張榮勝,陳志誼,劉永鋒. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2014(04)
[7]多胺在微生物中的研究進展[J]. 姚響文,周密,曹穎瑛,姜遠英. 中國真菌學雜志. 2014(02)
[8]水稻條斑病菌胞外多糖相關(guān)基因的鑒定[J]. 周丹,鄒麗芳,鄒華松,陳功友. 微生物學報. 2011(10)
[9]水稻細菌性條斑病的研究概述[J]. 劉姮,李雪琴. 湖北植保. 2011(05)
[10]水稻細菌性條斑病菌中受DSF調(diào)控的鞭毛基因flgD、flgE的功能分析[J]. 殷芳群,趙延存,劉春暉,錢國良,范加勤,胡白石,劉鳳權(quán). 微生物學報. 2011(07)
碩士論文
[1]OsbHLH81基因在水稻抗條斑病和白葉枯病中的功能鑒定[D]. 左麗萍.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]蠟樣芽孢桿菌蛋白質(zhì)量控制系統(tǒng)ClpX/Hsp100家族組分的生理功能分析[D]. 熊曦.河南大學 2017
本文編號：3727055
本文鏈接：http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/3727055.html
【文章頁數(shù)】：71 頁
【學位級別】：碩士
【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
1 前言
1.1 水稻細菌性條斑病
1.1.1 水稻細菌性條斑病菌的特征及其危害
1.1.2 水稻細菌性條斑病的防治
1.2 水稻細菌性條斑病菌的研究進展
1.2.1 有關(guān)Ⅲ型分泌系統(tǒng)的研究
1.2.2 有關(guān)DSF依賴性群體感應系統(tǒng)的研究
1.2.3 胞外多糖等其它相關(guān)研究
1.3 ClpX在細菌中功能
1.4 亞精胺合成酶在生物體內(nèi)的功能
1.5 立題依據(jù)
2 材料與方法
2.1 實驗材料
2.1.1 供試菌株
2.1.2 供試質(zhì)粒
2.1.3 供試引物
2.1.4 培養(yǎng)基
2.1.5 實驗試劑
2.1.6 供試種子
2.2 實驗方法
2.2.1 小量質(zhì)粒的提取
2.2.2 水稻細菌性條斑病菌基因組DNA的提取
2.2.3 大腸桿菌感受態(tài)細胞制備方法
2.2.4 致病性測定方法
2.2.5 轉(zhuǎn)座子Tn5插入突變體庫的構(gòu)建
2.2.6 致病能力相關(guān)基因的初步鑒定
2.2.7 缺失菌株的構(gòu)建
2.2.8 基因互補菌株的構(gòu)建
2.2.9 野生型XocRS105及其衍生菌株表型測定
3 結(jié)果與分析
3.1 篩選獲得2個與致病性有關(guān)的轉(zhuǎn)座子插入突變體
3.2 構(gòu)建基因缺失菌株和互補菌株以及致病能力的驗證
3.2.1 構(gòu)建clp X和 spe E的基因敲除載體
3.2.2 獲得clp X和 spe E基因缺失菌株
3.2.3 構(gòu)建基因互補載體
3.2.4 獲得基因互補菌株
3.2.5 基因clp X和 spe E參與Xoc RS105 對水稻的致病性
3.3 clp X與 spe E基因的鑒定
3.3.1 clpX基因的鑒定
3.3.2 speE基因的鑒定
3.4 野生型Xoc RS105、Δclp X及其互補菌株致病性相關(guān)型的測定
3.4.1 運動能力的測定
3.4.2 產(chǎn)胞外蛋白酶能力的測定
3.4.3 產(chǎn)胞外多糖能力的測定
3.4.4 細菌生長曲線的測定
3.4.5 抗脅迫能力的測定
3.4.6 耐熱能力的測定
3.4.7 在水稻葉片內(nèi)定殖能力測定
3.5 野生型Xoc RS105、Δspe E及其互補菌株致病性相關(guān)型的測定
3.5.1 運動能力測定
3.5.2 抗脅迫能力的測定
3.5.3 耐熱能力的測定
3.5.4 在水稻葉片內(nèi)定殖能力測定
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻
致謝
【參考文獻】：
期刊論文
[1]OsBGLU19 and OsBGLU23 regulate disease resistance to bacterial leaf streak in rice[J]. LI Bei-bei,LIU Ying-gao,WU Tao,WANG Ji-peng,XIE Gui-rong,CHU Zhao-hui,DING Xin-hua. Journal of Integrative Agriculture. 2019(06)
[2]水稻細菌性條斑病4種接種方法的比較[J]. 趙嚴,羅登杰,何圣賢,劉芳. 亞熱帶農(nóng)業(yè)研究. 2018(04)
[3]水稻細菌性條斑病防治研究進展[J]. 湯帥,楊遠航,潘素君,林木青,戴良英,李魏. 農(nóng)學學報. 2018(11)
[4]An Inner Membrane Protein（Imp） of Xanthomonas oryzae pv. oryzicola Functions in Carbon Acquisition, EPS Production, Bacterial Motility and Virulence in Rice[J]. CAI Lu-lu,ZOU Li-fang,GE Ling,XUE Xiao-bo,ZOU Hua-song,CHEN Gong-you. Journal of Integrative Agriculture. 2014(12)
[5]解淀粉芽孢桿菌Lx-11對水稻細菌性條斑病的防治效果[J]. 張榮勝,戴秀華,陳志誼. 江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2014(10)
[6]水稻細菌性條斑病研究進展[J]. 張榮勝,陳志誼,劉永鋒. 江蘇農(nóng)業(yè)學報. 2014(04)
[7]多胺在微生物中的研究進展[J]. 姚響文,周密,曹穎瑛,姜遠英. 中國真菌學雜志. 2014(02)
[8]水稻條斑病菌胞外多糖相關(guān)基因的鑒定[J]. 周丹,鄒麗芳,鄒華松,陳功友. 微生物學報. 2011(10)
[9]水稻細菌性條斑病的研究概述[J]. 劉姮,李雪琴. 湖北植保. 2011(05)
[10]水稻細菌性條斑病菌中受DSF調(diào)控的鞭毛基因flgD、flgE的功能分析[J]. 殷芳群,趙延存,劉春暉,錢國良,范加勤,胡白石,劉鳳權(quán). 微生物學報. 2011(07)
碩士論文
[1]OsbHLH81基因在水稻抗條斑病和白葉枯病中的功能鑒定[D]. 左麗萍.山東農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]蠟樣芽孢桿菌蛋白質(zhì)量控制系統(tǒng)ClpX/Hsp100家族組分的生理功能分析[D]. 熊曦.河南大學 2017
本文編號：3727055
本文鏈接：http://sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/3727055.html
最近更新
教材專著
