肺癌作為致死率和發(fā)病率最高的惡性腫瘤,因其轉(zhuǎn)移率高、復(fù)發(fā)率高、死亡率高和預(yù)后率低等特點(diǎn)逐漸成為世界范圍內(nèi)的一個公共衛(wèi)生問題。肺癌的發(fā)生受多基因、多信號通路調(diào)控,因此,了解肺癌的發(fā)生發(fā)展和作用機(jī)制對臨床治療肺癌有重要意義。發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子1（Hairy and enhancer of split homolog-1,HES1）屬于前神經(jīng)元堿性螺旋-環(huán)-螺旋（proneural basic helix-loop-helix,bHLH）轉(zhuǎn)錄因子家族的成員之一,多項(xiàng)研究表明HES1作為癌基因,不僅在多種實(shí)體瘤中表達(dá)異常,還與多種惡性腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān),并且在非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）中也存在HES1蛋白高表達(dá),但是關(guān)于HES1對NSCLC細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響還缺乏有效的研究。本實(shí)驗(yàn)通過慢病毒質(zhì)粒感染法敲降HES1基因的表達(dá),探討HES1基因?qū)θ薔SCLC增殖、遷移和侵襲等生物學(xué)過程的影響及作用機(jī)制。本文進(jìn)行了如下研究:體外合成一條無關(guān)的shRNA和兩條靶向HES1基因的shRNA,分別插入pLKO.1質(zhì)粒中構(gòu)成3個shRNA表... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
主要中英文縮略表
第1章 前言
    1.1 概述
    1.2 肺癌的研究現(xiàn)狀
        1.2.1 嚴(yán)峻的肺癌患病形勢
        1.2.2 肺癌的診治方法
    1.3 腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移
        1.3.1 腫瘤轉(zhuǎn)移前微環(huán)境
        1.3.2 腫瘤轉(zhuǎn)移基因
        1.3.3 細(xì)胞外基質(zhì)降解
        1.3.4 上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
    1.4 RNAi技術(shù)
        1.4.1 RNAi的作用機(jī)制
        1.4.2 RNAi的作用特點(diǎn)
    1.5 HES1
        1.5.1 HES1 的結(jié)構(gòu)
        1.5.2 HES1 對發(fā)育的影響
        1.5.3 HES1 在多種腫瘤中異常表達(dá)
    1.6 本研究的目的及意義
    1.7 研究路線
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.4 質(zhì)粒與菌種
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.2 構(gòu)建sh-HES1 載體
        2.2.3 慢病毒包裝
        2.2.4 慢病毒感染
        2.2.5 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 Western blot 實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 MTT 實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 傷口愈合實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 Transwell 遷移實(shí)驗(yàn)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
    3.1 常規(guī)條件培養(yǎng)下A549 細(xì)胞的形態(tài)
    3.2 非小細(xì)胞肺癌A549中HES1 的表達(dá)
    3.3 sh-HES1-2 抑制A549中HES1 的表達(dá)
    3.4 HES1 基因表達(dá)的下調(diào)對NSCLL A549 細(xì)胞增殖的影響
    3.5 HES1 基因表達(dá)的下調(diào)對NSCLL A549 細(xì)胞遷移的影響
        3.5.1 傷口愈傷實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5.2 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.6 HES1 基因表達(dá)的下調(diào)對NSCLLA549 細(xì)胞侵襲的影響
    3.7 敲降HES1 基因?qū)SCLCA549 細(xì)胞中PI3K/AKT信號通路及EMT的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
在學(xué)期間的科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[2]Hes1與Akt/Stat3相互整合在缺血后適應(yīng)中的心肌保護(hù)作用[D]. 趙勇.南昌大學(xué) 2014
[3]Hes1基因與原發(fā)性肝癌發(fā)生相關(guān)性的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究[D]. 馮娜.第二軍醫(yī)大學(xué) 2013
[4]Hes1和Hes2差異性表達(dá)影響肝癌術(shù)后預(yù)后[D]. 樊嘯.蘇州大學(xué) 2012
[5]蛋白酶激活受體2基因沉默對肝癌SMMC-7721細(xì)胞增殖和侵襲遷移能力的影響[D]. 趙建業(yè).河北醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：3726946