短小蛇根草（Ophiorrhiza pumila）,隸屬茜草科（Rubiaceae）蛇根草屬（Ophiorrhiza）,是一種多年生雙子葉草本植物,全草含抗癌藥物喜樹堿（CPT）及其衍生物。喜樹堿衍生類藥物目前廣泛應(yīng)用于癌癥臨床治療,但藥源的短缺成為研發(fā)和應(yīng)用喜樹堿類化合物的巨大瓶頸。而植物次生代謝工程的發(fā)展為解決藥源短缺,提高藥用成分含量提供了一個(gè)很好的解決方案。本研究通過采用短小蛇根草轉(zhuǎn)錄組測(cè)序和基因工程手段,挖掘了參與調(diào)控喜樹堿生物合成的相關(guān)基因,初步研究了其功能,并獲得了高產(chǎn)喜樹堿的轉(zhuǎn)基因材料。1、根據(jù)與擬南芥基因序列比對(duì)注釋,選擇可能參與次生代謝合成調(diào)控的16條全長(zhǎng)bHLH轉(zhuǎn)錄因子,進(jìn)行后續(xù)分析。通過基因克隆、結(jié)構(gòu)域以及功能預(yù)測(cè)、組織表達(dá)譜等,最終選擇OpMYC2L1和OpMYC2L2這兩條轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行了功能研究。2、為了確認(rèn)OpMYC2L1和OpMYC2L2在喜樹堿合成途徑中的作用,分別構(gòu)建了OpMYC2L1和OpMYC2L2的過表達(dá)和抑制表達(dá)載體,在短小蛇根草體內(nèi)進(jìn)行了功能驗(yàn)證。通過轉(zhuǎn)基因毛狀根株系喜樹堿含量測(cè)定發(fā)現(xiàn),在過表達(dá)的株系中,喜樹堿的含量都上調(diào)了2倍以上,裂環(huán)馬... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

野生短小蛇根草注：A-根，B-莖，C-葉，D-花，E-蒴果，F(xiàn)-幼苗，G-植株，H-繪制圖（中國(guó)植物圖像庫）

圖1-2兩種已經(jīng)上市的喜樹堿類藥物Fig1-2Twokindsofcamptothecindrugshavebeenlisted

喜樹堿的結(jié)合位點(diǎn)圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]丹參bHLH類轉(zhuǎn)錄因子的基因克隆及功能初步研究[D]. 王曉榮.上海師范大學(xué) 2015



本文編號(hào)：3721737