發(fā)布時(shí)間：2022-12-07 06:45

　　法氏柴胡寬蛾Depressaria falkovitshi Lvovsky作為本課題組在2013年發(fā)現(xiàn)的中國新紀(jì)錄種,是我國柴胡種植區(qū)的一種優(yōu)勢害蟲,主要以幼蟲取食危害柴胡種子、嫩葉、莖尖和花蕾,蟲害大發(fā)生時(shí)危害率可達(dá)90%,嚴(yán)重影響了柴胡的產(chǎn)量和品質(zhì)。由于其繁殖力強(qiáng)、自然天敵少且具有卷葉習(xí)性等特點(diǎn)難以防治。研究法氏柴胡寬蛾的氣味結(jié)合蛋白有助于深入了解昆蟲的嗅覺機(jī)制,可進(jìn)一步研究法氏柴胡寬蛾與寄主植物的關(guān)系,進(jìn)而為研發(fā)相關(guān)的引誘劑、趨避劑等新型藥劑提供新思路。為此,本研究利用法氏柴胡寬蛾轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),通過生物信息學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法,從法氏柴胡寬蛾中克隆了2個(gè)氣味結(jié)合蛋白基因,并對其進(jìn)行了體外表達(dá),測定了它們的表達(dá)譜。主要研究結(jié)果如下:1.結(jié)合法氏柴胡寬蛾成蟲轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)分析并利用RT-PCR技術(shù),本研究成功克隆得到兩個(gè)氣味結(jié)合蛋白基因DfalOBP1（GenBank登錄號:MG882075）和DfalOBP3（GenBank登錄號:MG882077）。DfalOBP1基因開放閱讀框長420bp,編碼139個(gè)氨基酸,N-末端包含18個(gè)氨基酸組成的信號肽,預(yù)測蛋白分子量大小為16.22... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
1 引言
    1.1 法氏柴胡寬蛾
        1.1.1 法氏柴胡寬蛾形態(tài)特征
        1.1.2 法氏柴胡寬蛾危害特點(diǎn)
        1.1.3 法氏柴胡寬蛾的研究現(xiàn)狀
    1.2 嗅覺感器
    1.3 嗅覺感受機(jī)制
    1.4 氣味結(jié)合蛋白研究進(jìn)展
        1.4.1 種類
        1.4.2 分布
        1.4.3 生化特性
        1.4.4 生理功能
        1.4.5 三維結(jié)構(gòu)
        1.4.6 配體的結(jié)合和釋放機(jī)制
        1.4.7 研究方法
    1.5 本研究的目的和意義
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 供試?yán)ハx
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要設(shè)備儀器
    2.2 方法
        2.2.1 基因擴(kuò)增
        2.2.2 構(gòu)建表達(dá)載體
        2.2.3 蛋白表達(dá)
        2.2.4 內(nèi)參基因的篩選
        2.2.5 組織表達(dá)
3 結(jié)果與分析
    3.1 基因分析
        3.1.1 總RNA提取質(zhì)量檢測
        3.1.2 DfalOBP1和DfalOBP3 基因序列分析
        3.1.3 DfalOBP1和DfalOBP3 三維結(jié)構(gòu)模擬
        3.1.4 DfalOBP1和DfalOBP3 序列比對分析
        3.1.5 DfalOBP1和DfalOBP3 系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.2 蛋白表達(dá)
    3.3 內(nèi)參基因篩選
        3.3.1 候選內(nèi)參基因的克隆及熒光定量引物分析
        3.3.2 候選內(nèi)參基因的表達(dá)水平
        3.3.3 候選內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性分析
    3.4 組織表達(dá)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
附件
作者簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]梨小食心蟲Minus-C氣味結(jié)合蛋白的分子克隆、表達(dá)譜及結(jié)合特性分析[J]. 陳秀琳,蘇麗,陳麗慧,李怡萍,仵均祥,李廣偉.  昆蟲學(xué)報(bào). 2018(07)
[2]柑橘大實(shí)蠅氣味結(jié)合蛋白基因BminOBP25的克隆、原核表達(dá)及組織表達(dá)分析[J]. 司品法,周瓊,崔中翌.  昆蟲學(xué)報(bào). 2018(05)
[3]光肩星天牛氣味結(jié)合蛋白AglaOBP12的基因克隆、表達(dá)及配體結(jié)合特征[J]. 李廣偉,陳秀琳,尚天翠.  昆蟲學(xué)報(bào). 2017(10)
[4]印度谷螟實(shí)時(shí)熒光定量PCR內(nèi)參基因的選擇[J]. 唐培安,張棋麟,薛昊,袁明龍.  中國科學(xué):生命科學(xué). 2016(10)
[5]小菜蛾氣味結(jié)合蛋白OBP2基因的克隆、表達(dá)譜及其結(jié)合特性分析[J]. 程小娟,蔡立君,鄭麗雙,覃江梅,黃宇萍,尤民生.  昆蟲學(xué)報(bào). 2016(04)
[6]暗黑鰓金龜氣味結(jié)合蛋白HparOBP15a基因的克隆及功能分析[J]. 房遲琴,張鑫鑫,劉丹丹,李克斌,張帥,曹雅忠,樊東,尹姣.  昆蟲學(xué)報(bào). 2016(03)
[7]法氏柴胡寬蛾幼蟲齡期的劃分[J]. 萬喻,劉廷輝,王靜靜,何運(yùn)轉(zhuǎn).  應(yīng)用昆蟲學(xué)報(bào). 2015(06)
[8]梨小食心蟲觸角感器的超微結(jié)構(gòu)[J]. 張國輝,宋月芹,田曉麗,仵均祥.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(10)
[9]中華蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表達(dá)及組織表達(dá)譜[J]. 吉挺,沈芳,梁勤,吳黎明,劉振國,羅岳雄.  昆蟲學(xué)報(bào). 2014(08)
[10]危害柴胡的新害蟲——法氏柴胡寬蛾（鱗翅目:小潛蛾科:寬蛾亞科）[J]. 劉廷輝,萬喻,李后魂,何運(yùn)轉(zhuǎn).  河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2014(04)

碩士論文
[1]三島柴胡昆蟲群落結(jié)構(gòu)及主要害蟲生物學(xué)特性的研究[D]. 萬喻.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[2]甜菜夜蛾氣味結(jié)合蛋白的基因克隆、組織分布及配體結(jié)合能力分析[D]. 張婷.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012



本文編號：3712423