水稻胚乳中直鏈淀粉含量是影響稻米品質(zhì)最主要的因素,而其主要受蠟質(zhì)基因（Waxy,Wx）調(diào)控。Wx基因的等位變異是造成稻屬中直鏈淀粉含量廣泛變異的重要原因;挖掘并研究新的等位變異位點(diǎn),可進(jìn)一步揭示稻米品質(zhì)形成及其變異的遺傳機(jī)理,更可為稻米品質(zhì)改良提供新的基因資源和途徑。在前期的實(shí)驗(yàn)中,我們鑒定了一個(gè)控制稻米高直鏈淀粉含量但低淀粉粘滯性的Wx等位基因,Wxlsv。通過(guò)序列比對(duì),發(fā)現(xiàn)Wxlsv與Wxa的編碼區(qū)僅在第10外顯子處存在一個(gè)單堿基C-T差異,我們將該單堿基變異位點(diǎn)命名為SNP10C/T。對(duì)其它已知Wx等位基因測(cè)序發(fā)現(xiàn),只有Wx2在該位置處為T(mén),其它Wx等位基因都是C,與Wxlsv相同。為明確此單堿基差異在稻米淀粉品質(zhì)形成調(diào)控中的分子機(jī)理,開(kāi)展了以下研究:1、構(gòu)建了Wxa與Wxlsv的功能驗(yàn)證表達(dá)載體,并轉(zhuǎn)化糯稻Nip（wx）,與未轉(zhuǎn)化對(duì)照Nip（wx）相比,轉(zhuǎn)基因植株基本農(nóng)藝性狀沒(méi)有受到影響,但是籽粒變得透明。Nip（wx）-Wxlsv與Nip（wx）-Wxa轉(zhuǎn)基因稻米相比,表觀直鏈淀粉含量顯著提高,膠稠度下降,淀粉粘滯性顯著降低。同時(shí)又將Wxlsv表達(dá)載體單獨(dú)轉(zhuǎn)化Nip（Wxa）... 

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
符號(hào)說(shuō)明
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 稻米的蒸煮與食味品質(zhì)
        1.1.1 直鏈淀粉含量
        1.1.2 膠稠度
        1.1.3 糊化溫度
        1.1.4 淀粉粘滯性
    1.2 水稻蠟質(zhì)基因Wx
        1.2.1 Wx基因的等位變異類型
        1.2.2 Wx基因的表達(dá)調(diào)控
        1.2.3 Wx等位基因在育種中的應(yīng)用
    1.3 本研究的目的及意義
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料與試劑
    2.2 質(zhì)粒DNA的提取、酶切、連接與轉(zhuǎn)化
    2.3 DNA的克隆與序列分析
    2.4 功能驗(yàn)證載體的構(gòu)建
    2.5 根瘤農(nóng)桿菌介導(dǎo)的水稻轉(zhuǎn)化
    2.6 轉(zhuǎn)基因水稻的檢測(cè)
    2.7 稻米樣品的前處理
    2.8 稻米品質(zhì)的測(cè)定
        2.8.1 表觀直鏈淀粉含量的測(cè)定
        2.8.2 膠稠度的測(cè)定
        2.8.3 RVA譜的測(cè)定
        2.8.4 食味值的測(cè)定
    2.9 淀粉的提取
    2.10 淀粉的去脂
    2.11 水稻胚乳總RNA提取
    2.12 第一鏈cDNA的獲得
    2.13 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR
    2.14 蛋白的SDS-PAGE分析
    2.15 GBSSI蛋白的磷酸化測(cè)序
    2.16 GBSSI酶活的測(cè)定
    2.17 GBSSI蛋白的同源建模
    2.18 稻米及淀粉體外消化特性的測(cè)定
    2.19 統(tǒng)計(jì)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 SNP_(10)~(C/T)的轉(zhuǎn)基因功能驗(yàn)證
        3.1.1 功能驗(yàn)證載體的構(gòu)建
        3.1.2 T_0代轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        3.1.3 轉(zhuǎn)基因水稻純系的篩選
        3.1.4 轉(zhuǎn)基因植株表型分析
        3.1.5 Wx基因在轉(zhuǎn)基因水稻胚乳中的表達(dá)分析
        3.1.6 轉(zhuǎn)基因稻米成熟種子中蛋白水平表達(dá)分析
        3.1.7 轉(zhuǎn)基因稻米理化品質(zhì)的測(cè)定
        3.1.8 轉(zhuǎn)基因稻米淀粉粘滯性比較
    3.2 利用近等基因系分析SNP_(10)~(C/T)對(duì)稻米品質(zhì)的效應(yīng)
        3.2.1 不同背景下近等基因系的構(gòu)建及鑒定
        3.2.2 近等基因系稻米理化品質(zhì)分析
        3.2.3 近等基因系淀粉消化速率分析
    3.3 SNP_(10)~(C/T)對(duì)基因表達(dá)和酶活的效應(yīng)分析
        3.3.1 Wx基因轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)分析
        3.3.2 蛋白水平表達(dá)分析
        3.3.3 GBSSI酶活比較
        3.3.4 GBSSI蛋白結(jié)構(gòu)及磷酸化位點(diǎn)分析
    3.4 SNP_(10)~(C/T)在其它Wx等位基因背景下對(duì)稻米品質(zhì)的效應(yīng)
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因材料的創(chuàng)建與鑒定
        3.4.2 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(mp)背景下的效應(yīng)
        3.4.3 SNP_(10)~(C/T)在Wx~b背景下的效應(yīng)
        3.4.4 SNP_(10)~(C/T)在Wx~(in)背景下的效應(yīng)
4 小結(jié)與討論
    4.1 小結(jié)
    4.2 Wx基因SNP_(10)~(C/T)的效應(yīng)分析
    4.3 Wx~(lsv)與SNP_(10)~(C/T)在育種中的應(yīng)用前景
    4.4 研究展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3712401