目的探討肝細胞特異性敲除HuR基因?qū)π∈蟾闻K功能的影響。方法從美國Jackson實驗室引進LoxP標記的人抗原R（human antigen R,HuR）基因小鼠(HuR^fl/fl)和Alb-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠。雜交后,經(jīng)數(shù)代選育配種,建立肝細胞特異性HuR基因敲除小鼠(HuR^LKO)模型。PCR技術鑒別小鼠基因型,蛋白免疫印跡和免疫熒光實驗檢驗小鼠肝臟的HuR表達水平,同時HE染色觀察肝臟結(jié)構變化。高脂喂養(yǎng)HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl兩組小鼠,觀察小鼠體重、肝重和肝體比變化,提取血清檢測肝臟損傷和脂肪代謝相關指標。結(jié)果 PCR成功檢測篩選子代小鼠基因型,包括HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl小鼠。蛋白免疫印跡實驗和免疫熒光實驗證明小鼠肝細胞特異性HuR基因敲除成功。HE染色結(jié)果提示HuR^LKO小鼠的肝細胞出現(xiàn)變性水腫、局部壞死。高脂喂養(yǎng)實驗提示兩組小鼠在肝重、肝體比、AST、ALT、HDL-C、血... 

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 實驗動物
    1.2 主要試劑
    1.3 方法
        1.3.1 肝細胞HuR基因特異性敲除小鼠模型的構建:
        1.3.2 小鼠基因型檢測:
        1.3.3 小鼠HuR蛋白水平檢測:
        1.3.4 小鼠肝臟免疫熒光實驗:
        1.3.5 小鼠肝臟石蠟切片及HE染色:
        1.3.6 高脂喂養(yǎng)后小鼠血脂和肝功能檢測:
    1.4 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 通過基因型篩選獲得HuRfl/fl/Alb-Cre小鼠
    2.2 驗證小鼠肝細胞HuR敲除水平
    2.3 小鼠肝細胞HE染色鏡下結(jié)構
    2.4 小鼠高脂喂養(yǎng)后的情況
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Adaptive and maladaptive expression of the mRNA regulatory protein HuR[J]. Suman Govindaraju,Beth S Lee.  World Journal of Biological Chemistry. 2013(04)



本文編號：3710312