SWEET（Sugars Will Eventually be Exported Transporters）蛋白是近年來鑒定的一類新型糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可以選擇地將單糖或者二糖通過質(zhì)膜或者細(xì)胞內(nèi)膜進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn),在植物發(fā)育和脅迫反應(yīng)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。SWEET蛋白能從受感染的細(xì)胞中引起糖泄露從而使植物易感于病原菌。目前為止,SWEET基因已經(jīng)在擬南芥、水稻、番茄、棉花、煙草、馬鈴薯、大豆、梨等物種中被鑒定,然而在桑樹中還未有相關(guān)的報(bào)道,在桑樹脅迫反應(yīng)中發(fā)揮的作用也尚未知曉。另外,在本研究小組前期對(duì)易感桑椹菌核病品種和抗病品種的轉(zhuǎn)錄組測(cè)序比較分析發(fā)現(xiàn)部分SWEET基因與果桑菌核病的抗性有密切聯(lián)系。基于以上考慮,本研究通過生物信息學(xué)的方法,利用川桑數(shù)據(jù)庫全面鑒定了SWEET基因,對(duì)其基因結(jié)構(gòu)、跨膜結(jié)構(gòu)域和系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。通過熒光定量PCR分析了SWEET基因在青果、病果和紅果桑椹的表達(dá)模式,并選擇MaSWEET4和MaSWEET15為后續(xù)研究對(duì)象。構(gòu)建MaSWEET4和MaSWEET15過表達(dá)載體,以農(nóng)桿菌為介導(dǎo)轉(zhuǎn)入煙草中進(jìn)行異源表達(dá),成功獲得了3株MaSWEET4過表達(dá)轉(zhuǎn)基因煙草株系和4株Ma... 

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 植物體內(nèi)糖的代謝
    1.2 植物中糖的韌皮部裝載途徑
        1.2.1 質(zhì)外體裝載途徑
        1.2.2 共質(zhì)體裝載途徑
        1.2.3 聚合物捕獲途徑
    1.3 糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
        1.3.1 己糖和蔗糖/H+轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
        1.3.2 Na~+/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
        1.3.3 SWEET蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制
    1.4 SWEET蛋白的研究進(jìn)展
        1.4.1 SWEET蛋白的結(jié)構(gòu)和分類
        1.4.2 SWEET蛋白的生理功能
        1.4.3 桑樹SWEET蛋白的研究進(jìn)展
第二章 引言
    2.1 研究背景及意義
    2.2 研究主要內(nèi)容
    2.3 技術(shù)路線
第三章 桑樹SWEET基因的鑒定及生物信息學(xué)分析
    3.1 材料與方法
        3.1.1 桑樹SWEET基因的鑒定
        3.1.2 基因結(jié)構(gòu)及基序分析
        3.1.3 系統(tǒng)進(jìn)化分析及跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
    3.2 結(jié)果和分析
        3.2.1 桑樹SWEET基因的鑒定
        3.2.2 桑樹SWEET基因結(jié)構(gòu)與基序分析
        3.2.3 桑樹SWEET蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
        3.2.4 桑樹SWEET蛋白多序列比對(duì)與系統(tǒng)進(jìn)化分析
    3.3 小結(jié)與討論
第四章 桑樹SWEET基因的表達(dá)譜分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 RNA的提取
        4.2.2 cDNA第一鏈的合成與檢測(cè)
        4.2.3 桑樹SWEET基因的熒光定量PCR
    4.3 結(jié)果和分析
        4.3.1 桑樹SWEET基因的組織表達(dá)分析
    4.4 小結(jié)與討論
第五章 Ma SWEET4及Ma SWEET15 的轉(zhuǎn)基因過表達(dá)分析
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.4 實(shí)驗(yàn)溶液配制方法
    5.2 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.1 轉(zhuǎn)基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.2.2 農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
        5.2.3 葉盤法轉(zhuǎn)化煙草
        5.2.4 轉(zhuǎn)基因植株的陽性檢測(cè)
        5.2.5 轉(zhuǎn)基因植株目的基因及抗病相關(guān)基因表達(dá)量的測(cè)定
    5.3 結(jié)果和分析
        5.3.1 Ma SWEET4和Ma SWEET15 轉(zhuǎn)基因過表達(dá)載體的構(gòu)建
        5.3.2 陽性轉(zhuǎn)基因煙草的驗(yàn)證
        5.3.3 陽性轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)抗病相關(guān)基因的影響
    5.4 小結(jié)與討論
第六章 綜合與結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表論文及參加課題
致謝



本文編號(hào)：3705508