發(fā)布時間：2022-11-04 18:36

　　泛素-蛋白酶體途徑是生物體當(dāng)中修飾以及降解蛋白質(zhì)的重要系統(tǒng)。該途徑主要通過三種酶（包括E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶以及E3泛素連接酶）催化的級聯(lián)反應(yīng)發(fā)生作用,將泛素蛋白活化并連接至底物蛋白上。被泛素蛋白特異性泛素化修飾的底物蛋白,其蛋白質(zhì)的活性、穩(wěn)定性或細胞定位發(fā)生變化,從而調(diào)控植物的生長發(fā)育和脅迫響應(yīng),包括植物抗病、抗旱、抗鹽、形態(tài)建成以及激素合成等生理活動起到重要的作用。CRL4（CUL4-RING E3 ubiquitin ligasea）是近來發(fā)現(xiàn)的E3泛素連接酶的一種,該復(fù)合體的功能和調(diào)節(jié)機制豐富。該泛素連接酶由三部分組成,CUL4的功能是作為該泛素連接酶的支架蛋白,DNA損傷連接蛋白（DDB1）是核心組件,以及底物連接蛋白WD40家族。WD40蛋白與CUL4-DDB1結(jié)合之后,形成復(fù)合體CUL4-DDB1-WD40,是一種E3泛素連接酶復(fù)合體,靶向修飾不同底物蛋白從而調(diào)控植物的生長發(fā)育和脅迫響應(yīng)等。本研究發(fā)現(xiàn)了番茄E3泛素連接酶的底物連接蛋白Sl WDR204,參與調(diào)控植物響應(yīng)干旱脅迫和植株株高發(fā)育。RT-PCR檢測Sl WDR204基因在番茄各組織中,包括根、莖、葉、花... 

【文章頁數(shù)】：84 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
abstract
英文對照及其英文縮寫表
第一章 文章綜述
    1.1 泛素-蛋白酶體系統(tǒng)
        1.1.1 蛋白質(zhì)的泛素化進程
        1.1.2 E3泛素連接酶的研究
        1.1.3 WD40家族蛋白的研究進展
    1.2 植物響應(yīng)干旱脅迫的研究
        1.2.1 干旱脅迫對植物的影響
        1.2.2 植物響應(yīng)干旱脅迫的信號傳導(dǎo)
        1.2.3 植物響應(yīng)干旱脅迫的調(diào)控機制
    1.3 植物株高調(diào)控的研究
    1.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化以及應(yīng)用
        1.4.1 農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化機理
        1.4.2 農(nóng)桿菌遺傳轉(zhuǎn)化的應(yīng)用
第二章 實驗材料和方法
    2.1 序列數(shù)據(jù)
    2.2 實驗材料
        2.2.1 植物材料
        2.2.2 常用生化試劑
        2.2.3 主要儀器和設(shè)備
        2.2.4 菌株
        2.2.5 載體
        2.2.6 試劑以及試劑盒
        2.2.7 分子克隆相關(guān)試劑
        2.2.8 番茄的組織培養(yǎng)所需的試劑
        2.2.9 煙草瞬時表達相關(guān)試劑
        2.2.10 酵母雙雜交實驗的相關(guān)試劑
        2.2.11 引物序列
    2.3 實驗方法
        2.3.1 總RNA的提取
        2.3.2 cDNA的合成
        2.3.3 載體構(gòu)建
        2.3.4 獲得番茄目的基因的片段
        2.3.5 瓊脂糖凝膠電泳DNA的回收純化
        2.3.6 限制性內(nèi)切酶酶切反應(yīng)
        2.3.7 DNA片段與載體的連接
        2.3.8 制備大腸桿菌感受態(tài)細胞
        2.3.9 大腸桿菌的轉(zhuǎn)化
        2.3.10 農(nóng)桿菌GV2260/EHA105感受態(tài)細胞的制備
        2.3.11 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.3.12 大腸桿菌/農(nóng)桿菌陽性克隆鑒定
        2.3.13 轉(zhuǎn)基因番茄的構(gòu)建
        2.3.14 植物的干旱脅迫實驗
        2.3.15 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草瞬時表達
        2.3.16 亞細胞定位
        2.3.17 酵母雙雜交實驗
第三章 實驗結(jié)果和分析
    3.1 番茄SlWDR204基因的生物信息學(xué)的分析
    3.2 番茄SlWDR204蛋白的進化樹分析
    3.3 番茄SlWDR204基因植物表達模式的分析
    3.4 相關(guān)載體構(gòu)建
        3.4.1 番茄SlWDR204基因的克隆
        3.4.2 番茄SlSPL3基因的克隆
        3.4.3 載體p ART27::Sl WDR204-GFP的構(gòu)建
        3.4.4 載體p BI121::Sl WDR204 的構(gòu)建
        3.4.5 載體p BI121::Sl WDR204-RNAi的構(gòu)建
        3.4.6 載體p EG202::Sl WDR204 的構(gòu)建
        3.4.7 載體p JG4-5::Sl SPL3 的構(gòu)建
        3.4.8 載體p EG202::Sl SPL3 的構(gòu)建
    3.5 番茄SlWDR204蛋白的亞細胞定位
    3.6 番茄的組織培養(yǎng)
        3.6.1 農(nóng)桿菌誘導(dǎo)目的基因轉(zhuǎn)化
        3.6.2 番茄愈傷組織的分化
        3.6.3 植株的生根
        3.6.4 番茄轉(zhuǎn)基因陽性鑒定
    3.7 番茄SlWDR204轉(zhuǎn)基因植株的干旱脅迫
    3.8 SlWDR204基因過表達增加番茄的株高
    3.9 Sl WDR204與SPL3 轉(zhuǎn)錄因子具有相互作用
    3.10 SlSPL3轉(zhuǎn)錄因子的亞細胞定位
    3.11 SlSPL3的轉(zhuǎn)錄激活作用
第四章 結(jié)論和討論
    4.1 結(jié)論和討論
    4.2 后續(xù)工作展望
參考文獻
攻讀碩士學(xué)位期間的學(xué)術(shù)活動及成果情況


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]擬南芥響應(yīng)滲透脅迫信號通路相關(guān)基因的篩選與功能驗證[D]. 王茜.杭州師范大學(xué) 2019
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[3]節(jié)水抗旱稻旱優(yōu)113號的根系生長對土壤干旱的響應(yīng)[D]. 補紅英.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2017
[4]E3泛素連接酶OsSINAT5調(diào)控水稻抗旱機制研究[D]. 林宇豐.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[5]利用農(nóng)桿菌對兩種微藻進行遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究[D]. 王潔.中國海洋大學(xué) 2013
[6]三種釣種柳品種的光合生理特性及抗旱性研究[D]. 陶文文.浙江農(nóng)林大學(xué) 2011
[7]八棱海棠與水稻AP2/EREBP類轉(zhuǎn)錄因子的克隆及功能分析[D]. 付曉燕.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2007
[8]轉(zhuǎn)鹽芥CBF1基因提高玉米抗逆性的研究[D]. 張淑娟.山東大學(xué) 2007



本文編號：3701124