柑橘褐斑�。ˋlternaria brown spot,ABS）是由交鏈格孢菌（Alternaria alternata）引起的一種真菌病害。該病害主要侵染橘及其雜交種,可貫穿柑橘整個(gè)生長(zhǎng)期,且以新梢和幼果期為害最為嚴(yán)重,造成落葉落果、枝梢枯死,嚴(yán)重影響柑橘產(chǎn)量與品質(zhì)。由G蛋白偶聯(lián)受體（G-protein-coupled receptors,GPCR）介導(dǎo)的cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是病原真菌中主要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑之一,對(duì)病原菌的生長(zhǎng)發(fā)育、形態(tài)建成和致病性等均有重要的調(diào)控作用。cAMP磷酸二酯酶可以有效調(diào)控胞內(nèi)基礎(chǔ)cAMP水平,因此對(duì)cAMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中磷酸二酯酶的作用機(jī)制研究成為近年的熱點(diǎn)。本試驗(yàn)克隆了高親和力磷酸二酯酶基因AaPDEH和低親和力磷酸二酯酶基因AaPDEL,并通過基因敲除技術(shù)得到突變體從而對(duì)目的基因進(jìn)行功能研究,主要研究結(jié)果如下:1.利用釀酒酵母pde1和pde2的蛋白序列作為參考,在柑橘褐斑病菌基因組全序列數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行BLAST比對(duì),得到了pde1和pde2的同源基因,分別命名為AaPDEL和AaPDEH。分析發(fā)現(xiàn),AaPDEL與稻瘟病菌、釀酒酵母、白色念珠菌等病原真菌的... 

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 柑橘褐斑病概況
        1.1.1 柑橘褐斑病及循環(huán)規(guī)律
        1.1.2 柑橘褐斑病菌毒素生成及致病機(jī)理
        1.1.3 柑橘褐斑病的防治
    1.2 植物病原真菌的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制
    1.3 cAMP信號(hào)途徑概述
        1.3.1 cAMP信號(hào)途徑的組成及作用
        1.3.2 釀酒酵母中c AMP信號(hào)途徑的研究
        1.3.3 其他病原真菌中的c AMP信號(hào)途徑的功能
    1.4 環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(PDE)
        1.4.1 環(huán)核苷酸磷酸二酯酶家族
        1.4.2 釀酒酵母中的磷酸二酯酶
        1.4.3 其他病原真菌中的磷酸二酯酶
第2章 引言
第3章 柑橘褐斑病菌磷酸二酯酶生物信息學(xué)分析
    3.1 試驗(yàn)材料
        3.1.1 序列
        3.1.2 分析軟件
    3.2 試驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 AaPDEH和 Aa PDEL氨基酸序列結(jié)構(gòu)及保守結(jié)構(gòu)域分析
        3.3.2 AaPDEH和 Aa PDEL蛋白理化性質(zhì)分析
        3.3.3 AaPDEH和 Aa PDEL蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)分析
        3.3.4 AaPDEH和 Aa PDEL蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域預(yù)測(cè)
        3.3.5 AaPDEH和 Aa PDEL蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)肽、信號(hào)肽預(yù)測(cè)
        3.3.6 AaPDEH和 Aa PDEL蛋白亞細(xì)胞定位特征
    3.4 結(jié)論與討論
第4章 柑橘褐斑病菌PDEL和 PDEH基因敲除及回補(bǔ)載體的構(gòu)建
    4.1 試驗(yàn)材料
        4.1.1 菌株
        4.1.2 培養(yǎng)基
        4.1.3 試劑(盒)
        4.1.4 主要儀器、設(shè)備
    4.2 試驗(yàn)方法
        4.2.1 柑橘褐斑病菌PDEL和 PDEH基因序列的下載和引物設(shè)計(jì)
        4.2.2 CTAB法提取柑橘褐斑病菌Z7 菌株DNA
        4.2.3 質(zhì)粒pCB1003 擴(kuò)繁
        4.2.4 AaPDEL和 AaPDEH基因敲除載體的構(gòu)建
        4.2.5 原生質(zhì)體的制備及轉(zhuǎn)化
        4.2.6 AaPDEL和 AaPDEH敲除突變體的篩選及驗(yàn)證
        4.2.7 構(gòu)建AaPDEL、AaPDEH功能回補(bǔ)菌株
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 AaPDEL、AaPDEH基因敲除載體構(gòu)建過程
        4.3.2 驗(yàn)證AaPDEL、AaPDEH敲除突變體
        4.3.3 獲得AaPDEL、AaPDEH回補(bǔ)菌株
    4.4 結(jié)論與討論
第5章 柑橘褐斑病菌PDEL和 PDEH基因生物學(xué)功能初步研究
    5.1 試驗(yàn)材料
        5.1.1 菌株
        5.1.2 培養(yǎng)基
        5.1.3 試劑(盒)
        5.1.4 主要儀器、設(shè)備
    5.2 試驗(yàn)方法
        5.2.1 菌落形態(tài)、菌落生長(zhǎng)速度觀測(cè)
        5.2.2 產(chǎn)孢量測(cè)定、分生孢子形態(tài)觀察
        5.2.3 漆酶檢測(cè)及含量測(cè)定
        5.2.4 cAMP濃度測(cè)定
        5.2.5 壓力篩選
        5.2.6 致病性測(cè)定
    5.3 結(jié)果與分析
        5.3.1 AaPDEL的缺失影響菌落生長(zhǎng)
        5.3.2 AaPDEL的缺失影響產(chǎn)孢量及孢子形態(tài)
        5.3.3 AaPDEL和AaPDEL均參與調(diào)控漆酶活性
        5.3.4 AaPDEL和 AaPDEH均不參與調(diào)控胞內(nèi)cAMP水平
        5.3.5 AaPDEL參與調(diào)控對(duì)外界滲透壓脅迫的應(yīng)答
        5.3.6 AaPDEL參與調(diào)控細(xì)胞壁對(duì)外界脅迫的應(yīng)答
        5.3.7 AaPDEL參與調(diào)控菌株致病性
    5.4 結(jié)論與討論
第6章 主要結(jié)論及展望
    6.1 主要結(jié)論
    6.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄 縮寫詞表與中英文對(duì)照
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文及參與科研項(xiàng)目
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]玉米大斑病菌環(huán)腺苷酸磷酸二酯酶基因克隆及表達(dá)分析[J]. 申珅,李貞楊,趙玉蘭,李盼,韓建民,郝志敏,董金皋.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(16)
[2]禾谷鐮刀菌中FgPDE1基因的敲除及其功能的研究[J]. 常玉梅,侯占銘.  中國(guó)生物工程雜志. 2015(08)
[3]柑橘鏈格孢褐斑病的發(fā)生危害風(fēng)險(xiǎn)和治理對(duì)策[J]. 李紅葉,梅秀鳳,符雨詩(shī),黃峰,陳再廖,楊小平,王一光,黃海華.  果樹學(xué)報(bào). 2015(05)
[4]柑桔褐斑病菌毒素研究進(jìn)展[J]. 王玲杰,王洪秀,趙圓,唐科志.  中國(guó)南方果樹. 2014(03)
[5]雜柑褐斑病的病原鑒定[J]. 趙圓,王玲杰,王雪峰,唐科志,周常勇,李太盛.  果樹學(xué)報(bào). 2014(02)
[6]重慶萬(wàn)州紅桔褐斑病田間防治藥劑的篩選[J]. 李鴻筠,姚廷山,王聯(lián)英,胡軍華,劉浩強(qiáng),冉春.  中國(guó)南方果樹. 2013(03)
[7]甌柑褐斑病病原鑒定[J]. 黃峰,朱麗,侯欣,李紅葉.  浙江農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(09)
[8]柑桔鏈格孢菌殺菌劑的室內(nèi)篩選[J]. 趙永安,胡軍華,姚廷山,劉娟,冉春,劉浩強(qiáng),李鴻筠.  中國(guó)南方果樹. 2012(01)
[9]紅橘褐斑病病原鑒定[J]. 陳昌勝,黃峰,程蘭,馮春剛,黃濤江,李紅葉.  植物病理學(xué)報(bào). 2011(05)
[10]玉米大斑病菌漆酶活性測(cè)定及基因片段的克隆[J]. 曹志艷,藏金萍,賈慧,李旭光,王平.  華北農(nóng)學(xué)報(bào). 2011(02)

博士論文
[1]玉米大斑病菌cAMP磷酸二酯酶基因調(diào)控病菌發(fā)育的功能研究[D]. 申珅.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]稻瘟病菌G蛋白及MAPK信號(hào)途徑相關(guān)基因的功能分析[D]. 張海峰.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2011
[3]釀酒酵母高親和力cAMP磷酸二酯酶Pde2p的功能研究[D]. 胡蕓.天津大學(xué) 2010

碩士論文
[1]中國(guó)柑橘歷史與文化價(jià)值研究[D]. 曾云琦.福建農(nóng)林大學(xué) 2008
[2]釀酒酵母Pde1的細(xì)胞內(nèi)定位與定位調(diào)控機(jī)制的研究[D]. 蒲毅楠.天津大學(xué) 2005



本文編號(hào)：3699199